تغيرات في استحلاب PD-L1 تشكل استجابات المناعة المضادة للورم في الميلانوما

لونغ ليانغ شينوي كوانغ ي هي لين زو بوي لاو شين لي دينغن لو لان قونغ وينبين زو فانغلين زانغ شياوي ليانغ تشوفينغ بن داندان ليو تاو دينغ هوي لي شوانغ زهاو ،

النتائج

السكسينيل-CoA يشكل المناعة المضادة للأورام

الموت الخلوي المبرمج * موت الخلايا المبرمج *
	أيض الأحماض الدهنية **
	**
□	استجابة IFNγ
□	**
□	*
	**
	**
□	استجابة IFNα
□	*
	سبليسوسوم
	نسخ الحمض النووي
	دورة الخلية
	عوامل النسخ الأساسية
†	أهداف Myc v1
	أهداف E2F
	مسار مراقبة الرنا المرسال
	إصلاح الاقتطاع النووي
□ –	استقلاب الأدوية، إنزيمات أخرى *
	إصلاح الحمض النووي
	□

ب

(الشكل 1م، ن)، تليها تجارب قتل الخلايا التائية (الملاحظة التكميلية). أظهرت DES أو DMK زيادة في السمية الخلوية المعتمدة على الخلايا التائية، كما هو موضح بواسطة صبغة الكريستال البنفسجي، في حين لم تتأثر تكاثر الورم في غياب الخلايا التائية (الملاحظة التكميلية والشكل الممتد 3هـ). تم العلاج بمثبط SDH القابل للعكس DMM والمثبط غير القابل للعكس حمض 3-نيتروبروبيونيك (3-NPA)، الذي يرتبط تساهميًا بمتبقية الأرجينين في النواة الحفازة للديهايدروجيناز السكسينيك A (SDHA) إلى تعطيل SDH، مما أدى إلى تراكم السكسينات داخل الخلايا، وانخفاض الفومارات وزيادة قتل خلايا الورم بواسطة خلايا T (الشكل 3f، g من البيانات الموسعة). ومع ذلك، فإن مثبط OGDH (CPI-613) قلل من السمية الخلوية لخلايا T، مما يشير إلى أن AKG يتم تحويله بواسطة OGDH إلى مستقلبات تالية تعزز من مناعة الورم (الشكل 3h من البيانات الموسعة). . من المحتمل أن تكون هذه المستقلبات هي السكسينيل-CoA والسكسينات، لأن السكسينات تزيد أيضًا من مستويات السكسينيل-CoA داخل الخلايا من خلال تفاعل عكسي يتم تحفيزه بواسطة SCS . بالإضافة إلى ذلك، يمكن أن يقلل الجلايسين من مستويات السكسينيل-CoA عبر مسار تخليق الهيم . أدى العلاج المشترك لخلايا الورم مع الجلايسين ومثبطات SDH (DMM و3-NPA)، وDES أو DMK إلى تثبيط كبير في سُمية الخلايا التائية (الشكل 1o). أكدت تقنية الكروماتوغرافيا السائلة-مطياف الكتلة (LC-MS) أن هذه العلاجات زادت من مستويات السكسينيل-CoA، في حين أن الجلايسين قلل من مستويات السكسينيل-CoA (الشكل 1p). كما زادت تخليق الهيم مع الجلايسين وDES أو DMK (البيانات الموسعة الشكل 3i والملاحظة التكميلية). أظهرت عينات الورم من الفئران المعالجة بـ DES وDMK زيادات كبيرة في السكسينيل-CoA (البيانات الموسعة الشكل 3j). أدى تقليل OGDH أو إعطاء الجلايسين إلى تعزيز نمو الورم وقمع تنشيط خلايا T في الجسم الحي (الشكل الإضافي 3k-p). تشير هذه النتائج إلى أن زيادة مستوى السكسينيل-CoA داخل الخلايا تعزز من المناعة المضادة للأورام التي تعتمد على خلايا T.

زاد السكسينيل-CoA من نشاط خلايا CTL عن طريق تقليل PD-L1 في خلايا السرطان

تحفيز التحلل لبروتين PD-L1 عند Lys129

يعتبر السكسينيلation تعديلًا فريدًا للبروتينات. على عكس الميثيليشن (14 دالتون) والأسيتيلation (40 دالتون)، فإن السكسينيلation (100 دالتون) يسبب تغييرًا ملحوظًا في الكتلة ويحول الشحنة الموجبة إلى سالبة، مما يؤثر على تنظيم وظيفة البروتين. كلا من السكسينات و AKG يرفعان

CPT1A يساهم في السكسينيلation لـ PD-L1

PD-L1 ( ). 1، تأثير علاج DES أو DMK على السكسينيلation لـ PD-L1 وتعبير CPT1A في الحويصلات الداخلية ( ” ). م، خلايا التعبير المفرط لـ CPT1A المعالجة بـ bafilomycin A1 و glycine، تليها تقنية الويسترن بلوت للكشف عن PD-L1 ( ” ). ن، التعبير الخارجي لـ CPT1A مع PD-L1 WT أو Lys129Arg (K129R)، تلاه تحليل الغربي للكشف عن PD-L1 ( ). تم تنقية CPTA1 والطفرات التي تتفاعل مع PD-L1 في السكسينيل-CoA للكشف عن السكسينيلation لـ PD-L1 ). ب، نمو الورم في الفئران التي تم حقنها بخلايا B16F10 التي تعبر عن CPT1A WT أو H473A أو G710E ( لكل مجموعة). تQuantification of و خلايا CTL في كتل الورم لكل مجموعة). تحديد كمية PD-L1 في خلايا الورم باستخدام تقنية تحليل تدفق الخلايا لكل مجموعة). صبغة المناعة لـ CD3 و CD8 و GZMB في أورام B16F10 ( لكل مجموعة). شريط القياس، للحصول على تفاصيل حول التصور والإحصائيات وإمكانية التكرار، انظر الطرق. ملاحظة، في يمثل عينات مستقلة بيولوجيًا، وفي اللوحات الأخرى، تجارب مستقلة.

مستويات CPT1A تت correlates مع فعالية الأجسام المضادة PD-1 في الميلانوما

الشكل 5 | تحفيز ارتفاع CPT1A يتعاون مع حجب CTLA-4.
تحليل البقعة الغربية لمستويات CPT1A و PD-L1 في الخلايا المعالجة بجرعات متفاوتة من BEZ ). يسار، نمو الورم لخلايا B16F10 في الفئران المناعية المعالجة بالتحكم، BEZ، مضاد CTLA-4 أو تركيبتها. يمين، أوزان الأورام ملخصة بعد euthanizing الفئران. لكل مجموعة). ج، بقاء الفئران الحاملة لورم B16F10 بعد العلاجات مع التحكم، BEZ، مضاد CTLA-4 أو تركيبتها ( لكل مجموعة). د، قياس و نسب CTL في كتل الأورام من مجموعات مختلفة لكل مجموعة). e، قياس مستويات PD-L1 في خلايا الورم باستخدام تحليل تدفق الخلايا ( لكل مجموعة). ف، تلوين مناعي لـ CD3 و CD8 و GZMB في كتل أورام B16F10 بعد العلاج ( لكل مجموعة). شريط القياس، نمو الورم لخلايا CPT1A KO (g) أو خلايا PD-L1 WT وLys129Arg (K129R) B16F10 (k)، جنبًا إلى جنب مع خلايا B16F10 التحكم السلبية، في الفئران المناعية المعالجة بـ BEZ
والمضاد لـ CTLA-4. تم تلخيص أوزان الأورام بعد القتل الرحيم ( لكل مجموعة). ح، ل، تقدير و نسب CTL (I) في كتل الأورام من مجموعات مختلفة لكل مجموعة). تحديد مستويات PD-L1 في خلايا الورم باستخدام قياس التدفق الخلوي مع خلايا CPT1A KO (i) أو خلايا PD-L1WT وLys129Arg (K129R) B16F10، بالإضافة إلى خلايا B16F10 كتحكم سلبي بعد العلاج مع BEZ وCTLA-4. لكل مجموعة). تلوين المناعة لـ CD3 و CD8 و GZMB في كتل أورام B16F10 بعد العلاج بخلايا CPT1A KO (j) أو خلايا PD-L1 WT و K129R B16F10 (n)، جنبًا إلى جنب مع خلايا B16F10 كعينة سلبية بعد العلاج بـ BEZ و CTLA-4 ( لكل مجموعة). شريط القياس، . لمزيد من التفاصيل حول التصور والإحصائيات وإمكانية التكرار، انظر الطرق. ملاحظة: في a، يمثل تجارب مستقلة، وفي الألواح الأخرى، عينات بيولوجية مستقلة.

الشكل 6 | مستويات CPT1A ترتبط بفعالية الأجسام المضادة PD-1 في الميلانوما.

نقاش

المحتوى عبر الإنترنت

References

1. Gonzalez, H., Hagerling, C. & Werb, Z. Roles of the immune system in cancer: from tumor initiation to metastatic progression. Genes Dev. 32, 1267-1284 (2018).
2. Korman, A. J., Garrett-Thomson, S. C. & Lonberg, N. The foundations of immune checkpoint blockade and the ipilimumab approval decennial. Nat. Rev. Drug Discov. 21, 509-528 (2022).
3. Ribas, A. & Wolchok, J. D. Cancer immunotherapy using checkpoint blockade. Science 359, 1350-1355 (2018).
4. Morad, G., Helmink, B. A., Sharma, P. & Wargo, J. A. Hallmarks of response, resistance, and toxicity to immune checkpoint blockade. Cell 184, 5309-5337(2021).
5. Kumagai, S. et al. Lactic acid promotes PD-1 expression in regulatory T cells in highly glycolytic tumor microenvironments. Cancer Cell 40, 201-218.e9 (2022).
6. Pucino, V. et al. Lactate buildup at the site of chronic inflammation promotes disease by inducing T cell metabolic rewiring. Cell Metab. 30, 1055-1074.e8 (2019).
7. Wu, X. et al. Targeting protein modifications in metabolic diseases: molecular mechanisms and targeted therapies. Signal Transduct. Target. Ther. 8, 220 (2023).
8. Diskin, C., Ryan, T. A. J. & ONeill, L. A. J. Modification of proteins by metabolites in immunity. Immunity 54, 19-31 (2021).
9. Zhang, Z. et al. Identification of lysine succinylation as a new post-translational modification. Nat. Chem. Biol. 7, 58-63 (2011).
10. Sreedhar, A., Wiese, E. K. & Hitosugi, T. Enzymatic and metabolic regulation of lysine succinylation. Genes Dis. 7, 166-171 (2020).
11. Alarcon, C., Wicksteed, B., Prentki, M., Corkey, B. E. & Rhodes, C. J. Succinate is a preferential metabolic stimulus-coupling signal for glucose-induced proinsulin biosynthesis translation. Diabetes 51, 2496-2504 (2002).
12. Xu, H. et al. Lysine acetylation and succinylation in HeLa cells and their essential roles in response to UV-induced stress. Sci. Rep. 6, 30212 (2016).
13. Wang, F. et al. SIRT5 desuccinylates and activates pyruvate kinase M2 to block macrophage IL-1 production and to prevent DSS-induced colitis in mice. Cell Rep. 19, 2331-2344 (2017).
14. Du, J. et al. Sirt5 is a NAD-dependent protein lysine demalonylase and desuccinylase. Science 334, 806-809 (2011).
15. Wang, Y. et al. KAT2A coupled with the -KGDH complex acts as a histone H3 succinyltransferase. Nature 552, 273-277 (2017).
16. Kurmi, K. et al. Carnitine palmitoyltransferase 1 A has a lysine succinyltransferase activity. Cell Rep. 22, 1365-1373 (2018).
17. Yuan, H.-F. et al. PRMT5 confers lipid metabolism reprogramming, tumour growth and metastasis depending on the SIRT7-mediated desuccinylation of PRMT5 K387 in tumours. Acta Pharmacol. Sin. 43, 2373-2385 (2022).
18. Harel, M. et al. Proteomics of melanoma response to immunotherapy reveals mitochondrial dependence. Cell 179, 236-250.e18 (2019).
19. Wu, J.-Y. et al. Cancer-derived succinate promotes macrophage polarization and cancer metastasis via succinate receptor. Mol. Cell 77, 213-227.e5 (2020).
20. Liu, P.-S. et al. -Ketoglutarate orchestrates macrophage activation through metabolic and epigenetic reprogramming. Nat. Immunol. 18, 985-994 (2017).
21. Yang, Y. et al. Succinate dehydrogenase inhibitor dimethyl malonate alleviates LPS/D-galactosamine-induced acute hepatic damage in mice. Innate Immun. 25, 522-529 (2019).
22. Scallet, A. C., Haley, R. L., Scallet, D. M., Duhart, H. M. & Binienda, Z. K. 3-Nitropropionic acid inhibition of succinate dehydrogenase (complex II) activity in cultured Chinese hamster ovary cells: antagonism by L-carnitine. Ann. NY Acad. Sci. 993, 305-309 (2003).
23. Dörsam, B. & Fahrer, J. The disulfide compound -lipoic acid and its derivatives: a novel class of anticancer agents targeting mitochondria. Cancer Lett. 371, 12-19 (2016).
24. Furuyama, K. & Sassa, S. Interaction between succinyl CoA synthetase and the heme-biosynthetic enzyme ALAS-E is disrupted in sideroblastic anemia. J. Clin. Invest. 105, 757-764 (2000).
25. Li, F. et al. NADP -IDH mutations promote hypersuccinylation that impairs mitochondria respiration and induces apoptosis resistance. Mol. Cell 60, 661-675 (2015).
26. Nusinow, D. P. et al. Quantitative proteomics of the cancer cell line encyclopedia. Cell 180, 387-402.e16 (2020).
27. Chan, L.-C. et al. IL-6/JAK1 pathway drives PD-L1 Y112 phosphorylation to promote cancer immune evasion. J. Clin. Invest. 129, 3324-3338 (2019).
28. Burr, M. L. et al. CMTM6 maintains the expression of PD-L1 and regulates anti-tumour immunity. Nature 549, 101-105 (2017).
29. Maher, C. M. et al. Small-molecule sigma1 modulator induces autophagic degradation of PD-L1. Mol. Cancer Res. 16, 243-255 (2018).
30. Eletto, D., Dersh, D. & Argon, Y. GRP94 in ER quality control and stress responses. Semin. Cell Dev. Biol. 21, 479-485 (2010).
31. Pfeffer, S. R. Entry at the trans-face of the Golgi. Cold Spring Harb. Perspect. Biol. 3, a005272 (2011).
32. Ferro, E., Bosia, C. & Campa, C. C. RAB11-mediated trafficking and human cancers: an updated review. Biology (Basel) 10, 26 (2021).
33. Bucci, C., Bakke, O. & Progida, C. Rab7b and receptors trafficking. Commun. Integr. Biol. 3, 401-404 (2010).
34. Cheng, X.-T. et al. Revisiting LAMP1 as a marker for degradative autophagy-lysosomal organelles in the nervous system. Autophagy 14, 1472-1474 (2018).
35. Smestad, J., Erber, L., Chen, Y. & Maher, L. J. 3rd Chromatin succinylation correlates with active gene expression and is perturbed by defective TCA cycle metabolism. iScience 2, 63-75 (2018).
36. Wang, H. et al. HIP1R targets PD-L1 to lysosomal degradation to alter T cell-mediated cytotoxicity. Nat. Chem. Biol. 15, 42-50 (2019).
37. Yao, H. et al. Inhibiting PD-L1 palmitoylation enhances T-cell immune responses against tumours. Nat. Biomed. Eng. 3, 306-317 (2019).
38. Xie, X.-Q. et al. Targeting ATAD3A-PINK1-mitophagy axis overcomes chemoimmunotherapy resistance by redirecting PD-L1 to mitochondria. Cell Res. 33, 215-228 (2023).
39. Song, S. et al. Peroxisome proliferator activated receptor (PPARα) and PPAR gamma coactivator (PGC-1α) induce carnitine palmitoyltransferase IA (CPT-1A) via independent gene elements. Mol. Cell. Endocrinol. 325, 54-63 (2010).
40. Viscomi, C. et al. In vivo correction of COX deficiency by activation of the AMPK/PGC-1 axis. Cell Metab. 14, 80-90 (2011).
41. Brand, A. et al. LDHA-associated lactic acid production blunts tumor immunosurveillance by T and NK cells. Cell Metab. 24, 657-671 (2016).
42. Elia, I. et al. Tumor cells dictate anti-tumor immune responses by altering pyruvate utilization and succinate signaling in CD8 T cells. Cell Metab. 34, 1137-1150.e6 (2022).
43. Fischer, G. M. et al. Metabolic strategies of melanoma cells: mechanisms, interactions with the tumor microenvironment, and therapeutic implications. Pigment Cell Melanoma Res. 31, 11-30 (2018).
44. Altman, B. J., Stine, Z. E. & Dang, C. V. From Krebs to clinic: glutamine metabolism to cancer therapy. Nat. Rev. Cancer 16, 619-634 (2016).
45. Chang, L.-C., Chiang, S.-K., Chen, S.-E. & Hung, M.-C. Targeting 2-oxoglutarate dehydrogenase for cancer treatment. Am. J. Cancer Res. 12, 1436-1455 (2022).
46. Byun, J.-K. et al. Inhibition of glutamine utilization synergizes with immune checkpoint inhibitor to promote antitumor immunity. Mol. Cell 80, 592-606.e8 (2020).
47. Ishak Gabra, M. B. et al. Dietary glutamine supplementation suppresses epigenetically-activated oncogenic pathways to inhibit melanoma tumour growth. Nat. Commun. 11, 3326 (2020).
48. Leone, R. D. et al. Glutamine blockade induces divergent metabolic programs to overcome tumor immune evasion. Science 366, 1013-1021 (2019).
49. Martínez-Reyes, I. & Chandel, N. S. Mitochondrial TCA cycle metabolites control physiology and disease. Nat. Commun. 11, 102 (2020).
50. Cheng, J. et al. Cancer-cell-derived fumarate suppresses the anti-tumor capacity of CD8 cells in the tumor microenvironment. Cell Metab. 35, 961-978.e10 (2023).
51. Li, J. et al. HDAC1/2/3 are major histone desuccinylases critical for promoter desuccinylation. Cell Discov. 9, 85 (2023).
52. Su, Z. et al. TNF- -induced KAT2A Impedes BMMSC quiescence by mediating succinylation of the mitophagy-related protein VCP. Adv. Sci. 11, e2303388 (2024).
53. Gut, P. et al. SUCLA2 mutations cause global protein succinylation contributing to the pathomechanism of a hereditary mitochondrial disease. Nat. Commun. 11, 5927 (2020).
54. Cha, J.-H. et al. Metformin promotes antitumor immunity via endoplasmic-reticulum-associated degradation of PD-L1. Mol. Cell 71, 606-620.e7 (2018).
55. Gao, Y. et al. Acetylation-dependent regulation of PD-L1 nuclear translocation dictates the efficacy of anti-PD-1 immunotherapy. Nat. Cell Biol. 22, 1064-1075 (2020).
56. McGarry, J. D., Mannaerts, G. P. & Foster, D. W. A possible role for malonyl-CoA in the regulation of hepatic fatty acid oxidation and ketogenesis. J. Clin. Invest. 60, 265-270 (1977).
57. Mills, S. E., Foster, D. W. & McGarry, J. D. Interaction of malonyl-CoA and related compounds with mitochondria from different rat tissues. Relationship between ligand binding and inhibition of carnitine palmitoyltransferase I. Biochem. J 214, 83-91 (1983).
58. Ma, Y. et al. Functional analysis of molecular and pharmacological modulators of mitochondrial fatty acid oxidation. Sci. Rep. 10, 1450 (2020).
59. Lu, X. et al. Effective combinatorial immunotherapy for castration-resistant prostate cancer. Nature 543, 728-732 (2017).
60. Vazquez, F. et al. PGC1α expression defines a subset of human melanoma tumors withincreased mitochondrial capacity and resistance to oxidative stress. Cancer Cell 23, 287-301 (2013).
61. Luo, C. et al. A PGC1α-mediated transcriptional axis suppresses melanoma metastasis. Nature 537, 422-426 (2016).

طرق

بيان أخلاقي

زراعة الخلايا والعلاج

الأجسام المضادة والمواد الكيميائية

عزل RNA، RT-qPCR

التحليل الغربي

المناعية الفلورية

البلازميدات والناقلات

نموذج الفأر والعلاج التجريبي في الجسم الحي

جمع البيانات السريرية والعينات

تحليل إثراء المسارات و GSVA

تحليل النسخ الجيني المكاني لمجموعات بيانات الميلانوما

التصور، الإحصائيات وإمكانية التكرار

ملخص التقرير

توفر البيانات

توفر الشيفرة

References

62. Liu, H. et al. ADORA1 inhibition promotes tumor immune evasion by regulating the ATF3-PD-L1 axis. Cancer Cell 37, 324-339.e8 (2020).
63. . et al. The beneficial role of sunitinib in tumor immune surveillance by regulating tumor PD-L1. Adv. Sci. 8, 2001596 (2021).
64. Du, K. et al. Pathway signatures derived from on-treatment tumor specimens predict response to anti-PD1 blockade in metastatic melanoma. Nat. Commun. 12, 6023 (2021).
65. Yoshihara, K. et al. Inferring tumour purity and stromal and immune cell admixture from expression data. Nat. Commun. 4, 2612 (2013).
66. Hänzelmann, S., Castelo, R. & Guinney, J. GSVA: gene set variation analysis for microarray and RNA-Seq data. BMC Bioinf. 14, 7 (2013).
67. Charoentong, P. et al. Pan-cancer immunogenomic analyses reveal genotype-immunophenotype relationships and predictors of response to checkpoint blockade. Cell Rep. 18, 248-262 (2017).
68. Liberzon, A. et al. Molecular signatures database (MSigDB) 3.0. Bioinformatics 27, 1739-1740 (2011).
69. Sergushichev, A. A. An algorithm for fast preranked gene set enrichment analysis using cumulative statistic calculation. Preprint at bioRxiv https://doi.org/10.1101/060012 (2016).
70. Yu, G., Wang, L.-G., Han, Y. & He, Q.-Y. clusterProfiler: an R package for comparing biological themes among gene clusters. OMICS 16, 284-287 (2012).
71. Stuart, T. et al. Comprehensive integration of single-cell data. Cell 177, 1888-1902.e21 (2019).
72. Li, J. et al. Single-cell characterization of the cellular landscape of acral melanoma identifies novel targets for immunotherapy. Clin. Cancer Res. 28, 2131-2146 (2022).
73. Xun, Z. et al. Reconstruction of the tumor spatial microenvironment along the malignant-boundary-nonmalignant axis. Nat. Commun. 14, 933 (2023).
74. Beck, L. et al. Clinical proteomics of metastatic melanoma reveals profiles of organ specificity and treatment resistance. Clin. Cancer Res. 27, 2074-2086 (2021).
75. Xue, G. et al. Clinical drug screening reveals clofazimine potentiates the efficacy while reducing the toxicity of anti-PD-1 and CTLA-4 immunotherapy. Cancer Cell 42, 780-796.e6 (2024).
76. Gide, T. N. et al. Distinct immune cell populations define response to anti-PD-1 monotherapy and anti-PD-1/anti-CTLA-4 combined therapy. Cancer Cell 35, 238-255.e6 (2019).
77. Liu, D. et al. Integrative molecular and clinical modeling of clinical outcomes to PD1 blockade in patients with metastatic melanoma. Nat. Med. 25, 1916-1927 (2019).
78. Ulloa-Montoya, F. et al. Predictive gene signature in MAGE-A3 antigen-specific cancer immunotherapy. J. Clin. Oncol. 31, 2388-2395 (2013).
79. Jung, H. et al. DNA methylation loss promotes immune evasion of tumours with high mutation and copy number load. Nat. Commun. 10, 4278 (2019).
80. Chang, K. et al. The cancer genome atlas pan-cancer analysis project. Nat. Genet. 45, 1113-1120 (2013).
81. Edwards, N. J. et al. The CPTAC data portal: a resource for cancer proteomics research. J. Proteome Res. 14, 2707-2713 (2015).

شكر وتقدير

مساهمات المؤلفين

المصالح المتنافسة

معلومات إضافية

الشكل البياني الممتد 1| انظر الصفحة التالية للتعليق.

الشكل البياني الممتد 2 | انظر الصفحة التالية للتعليق.

الشكل البياني الممتد 3 | انظر الصفحة التالية للتعليق.

الشكل البياني الممتد 3 | تغيير مستويات السكسينيل-CoA في خلايا الورم يؤثر على نمو الورم في الجسم الحي. أ، تُبرز مخططات UMAP الأنواع الرئيسية من الخلايا في أنسجة الميلانوما (GSE189889). ب، يعرض DotPlot جينات العلامة لأنواع الخلايا الفرعية في النسخ الجيني أحادي الخلية. ج، يكشف VlnPlot عن الفروقات بين الميلانوما وأنواع الخلايا الأخرى. خلايا من 9 مرضى، تشمل 19392 خلية ميلانوما، 9554 خلية T، 425 خلية بلازما، 89 خلية مَاست، 1562 بلاعم، 214 خلية كيراتينوسيت، 2230 فيبروبلاست، 1701 خلية بطانية، 1041 خلية B). د، مستويات السكسينات و AKG في خلايا الورم والمناعة التي تم زراعتها مع DES أو DMK ( مجموعة). تم معالجة خلايا A375 بمستقلبات DES أو DMK، وزرعها مع خلايا T، وصبغها بصبغة الكريستال البنفسجي لقياس البقاء ( ). تم قياس مستويات الفومارات في خلايا A375 بعد معالجة DMM و 3-NPA بواسطة LC-MS مجموعة). ج، ح، خلايا A375 المعالجة بمثبط SDH (DMM أو 3-NPA) (ج) أو مثبط OGDH (CPI-613) (ح)، المزروعة مع خلايا T، وصبغت بصبغة الكريستال البنفسجي لقياس البقاء
( ). تم تحليل خلايا SK-MEL-28 المعالجة بـ DES و DMK والجليسين لمحتوى الهيمين مجموعة . مستويات السكسينيل-CoA في خلايا الورم المعزولة من فئران B16F10 المعالجة بـ DES أو DMK مجموعة). الخلايا shNC أو B16F10 مع انخفاض مستقر في تم حقنها في الفئران في اليوم 0. أكدت تقنية الويسترن بلوت انخفاض التعبير عن تم قياس حجم الورم في النقاط الزمنية المحددة. ملخص بيانات الوزن لورم الميلانوما B 16 F 10 الذي تم جمعه بعد قتل الفئران. مجموعة) (أنا). تQuantification of و نسب CTL في كتل الأورام من مجموعات مختلفة مجموعة). حجم الورم، الأوزان ( ) والبقاء (o) في فئران B16F10 المعالجة بالجليسين ( مجموعة). تQuantification of و CD8 نسب CTL في كتل الورم عبر مجموعات العلاج مجموعة). لمزيد من التفاصيل حول التصوير، الإحصائيات وإمكانية التكرار، انظر الطرق. ملاحظة: n تشير إلى النسخ البيولوجية المستقلة في جميع التجارب.

الشكل البياني الممتد 5 | انظر الصفحة التالية للتعليق.

الشكل البياني الممتد 5 | التأثيرات المضادة للورم لـ سوكسينيل-CoA من خلال تنظيم مستويات بروتين PD-L1. أ، تم معالجة خلايا SK-MEL-28 بمستقلبات مشابهة لدورة TCA (دي إيثيل سوكسينات [DES]، ثنائي ميثيل كيتوجلوتارات [DMK]، ثنائي ميثيل فومارات [DMF]، ثنائي ميثيل ماليات [DMA]، ثنائي ميثيل إيتاكونات [DMI]، ثلاثي إيثيل سترات [ETC]) لمدة 24 ساعة، وتم قياس مستويات بروتين PD-L1 بواسطة تقنية الويسترن بلوتينغ. ). ب، تم علاج الفئران الحاملة للورم B16F10 بـ DMM أو الجلايسين، أو خفض؛ تم قياس تعبير PD-L1 في خلايا الورم بواسطة تحليل تدفق الخلايا ( تم تقييم تعبير PD-L1 في خلايا سرطان الرئة H460، وسرطان الثدي MDA-MB-231، وسرطان القولون HCT-116 بعد العلاج بـ DES/DMK باستخدام تقنية Western blotting. تم قياس تعبير PD-L1 في الأورام والطحال والماكروفاجات في العقد اللمفاوية بواسطة تحليل تدفق الخلايا. مجموعة). تمت متابعة نقل البروتين الغربي لتعبير PD-L1 في تقليل ALAS1 (عن طريق shRNA) (e) أو زيادة تعبير Flag-ALAS1 (f) في خلايا SK-MEL-28 بعد إضافة IFN- التحريض (24 ساعة قبل الكشف؛ التحليل الغربي لـ PD-L1 و ALAS1 أو Flag، و GAPDH كعنصر تحكم في التحميل. ج، التحليل الغربي للتعبير عن PD-L1 في خلايا SK-MEL-28 المعالجة
مع مثبط ناقل الجلايسين 1 (بيتوبرتين) و IFN .ه، تعبير PD-L1 في أورام B16F10 بعد knockout لـ PD-L1 بواسطة CRISPR/Cas9 مجموعة “.أنا، تم قياس تعبير PD-L1 السطحي باستخدام تقنية تحليل تدفق الخلايا ( مجموعة ). تمت مراقبة وزن جسم الفئران في النقاط الزمنية المحددة مجموعة تعبير PD-L1 بعد knockout بواسطة CRISPR/Cas9 في خلايا A375.1، مستويات mRNA لـ PD-L1 في خلايا A375 المعالجة بـ 3-NPA أو DMM أو CPI-613 ( ). تحليل Western blot لبروتين PD-L1 في خلايا A375 (يمين) و SK-MEL-28 (يسار) المعالجة بـ DES/DMK، تليها MG132 و Bafilomycin A1 لتقييم مسارات تحلل البروتينات تحليل Western blot للبروتينات المرتبطة بالالتهام الذاتي (Beclin1، LC3، P62) بعد علاج DES/DMK ). o، التألق المناعي يظهر التوضع المشترك لـ PD-L1 مع علامة محددة للاوتوفاج (LC3I/II)، الشبكة الإندوبلازمية (GRP94)، جولجي (TGN46). مقياس الرسم: ، ( ).ملاحظة: تمثل تجارب مستقلة؛ ب، د، ي، ج، تمثل عينات مستقلة بيولوجياً.

الشكل البياني الممتد 7| انظر الصفحة التالية للتعليق.

الشكل البياني الممتد 8 | انظر الصفحة التالية للتعليق.

مجموعة TCGA-SKCM المرضى). ج، الفرق في مستويات تسلل الخلايا اللمفاوية السامة للخلايا بين مجموعتي CPT1A العالية وCPT1A المنخفضة في مجموعة TCGASKCM ( تم التعبير عن الطفرات البرية CPT1A الموسومة بـ GFP، H473A، وG710E بشكل مفرط في خلايا A375. تم تقييم جزيئات تقديم المستضد (HLA-A/B/C، HLA-DR) على خلايا الورم الإيجابية لـ GFP باستخدام تحليل تدفق الخلايا. مجموعة). أنا، مخطط الصندوق الذي يظهر الفروق في تعبير CPT1A وملفات السكسينيل (OGDH، SDH، مجمعات SCS، درجة SucciCoa) بين المستجيبين لمضاد CTLA-4 (R) وغير المستجيبين (NR) في مجموعتين مستقلتين من الميلانوما (Lu_CancerCell: المرضى؛ فان ألين_ساينس: المرضى). م، قياسات وزن الجسم للفئران المعالجة بالتحكم، بازر فيبات، أو مضاد CTLA-4 بمفرده أو بالاشتراك مع ( مجموعة). ملاحظة: n تشير إلى النسخ البيولوجية المستقلة في جميع التجارب.

محفظة الطبيعة

ملخص التقرير

الإحصائيات

لجميع التحليلات الإحصائية، تأكد من أن العناصر التالية موجودة في أسطورة الشكل، أسطورة الجدول، النص الرئيسي، أو قسم الطرق.
غير متوفر
تم التأكيد
□ X
حجم العينة بالضبط لكل مجموعة/شرط تجريبي، معطاة كرقم منفصل ووحدة قياس
□

بيان حول ما إذا كانت القياسات قد أُخذت من عينات متميزة أو ما إذا كانت نفس العينة قد تم قياسها عدة مرات
□ X
اختبار(ات) الإحصاء المستخدمة وما إذا كانت أحادية الجانب أو ثنائية الجانب
يجب أن تُوصف الاختبارات الشائعة فقط بالاسم؛ واصفًا التقنيات الأكثر تعقيدًا في قسم الطرق.

□ وصف لجميع المتغيرات المرافقة التي تم اختبارها
□ X
وصف لأي افتراضات أو تصحيحات، مثل اختبارات الطبيعية والتعديل للمقارنات المتعددة
□

وصف كامل للمعلمات الإحصائية بما في ذلك الاتجاه المركزي (مثل المتوسطات) أو تقديرات أساسية أخرى (مثل معامل الانحدار) و التباين (مثل الانحراف المعياري) أو تقديرات مرتبطة بعدم اليقين (مثل فترات الثقة)
□ X
لاختبار الفرضية الصفرية، فإن إحصائية الاختبار (على سبيل المثال، ) مع فترات الثقة، أحجام التأثير، درجات الحرية و قيمة ملحوظة أعطِ القيم كقيم دقيقة كلما كان ذلك مناسبًا.

□ لتحليل بايزي، معلومات حول اختيار القيم الأولية وإعدادات سلسلة ماركوف مونت كارلو

البرمجيات والشيفرة

بيانات

• رموز الانضمام، معرفات فريدة، أو روابط ويب لمجموعات البيانات المتاحة للجمهور
• وصف لأي قيود على توفر البيانات
• بالنسبة لمجموعات البيانات السريرية أو بيانات الطرف الثالث، يرجى التأكد من أن البيان يتماشى مع سياستنا

البحث الذي يتضمن مشاركين بشريين، بياناتهم، أو مواد بيولوجية

التقارير الخاصة بالمجال

تصميم دراسة العلوم الحياتية

التقارير عن مواد وأنظمة وطرق محددة

غير متوفر	مشارك في الدراسة	غير متوفر
□	أجسام مضادة X
□	– خطوط خلايا حقيقية النواة	□
V	□ علم الحفريات وعلم الآثار	إكس
□	【 الحيوانات وغيرها من الكائنات الحية
إكس	□
إكس	□

الأجسام المضادة

خطوط خلايا حقيقية النواة

الحيوانات وغيرها من الكائنات البحثية

رقابة الأخلاقيات

النباتات

تدفق الخلايا

المؤامرات

أكد أن:

المنهجية

Alterations in PD-L1 succinylation shape anti-tumor immune responses in melanoma

Long Liang , Xinwei Kuang , Yi He , Lin Zhu , Poyee Lau , Xin Li , Dingan Luo , Lan Gong , Wenbin Zhou , Fanglin Zhang , Xiaowei Liang , Zhuofeng , Bin , Dandan Liu , Tao Ding , Hui Li , Shuang Zhao ,