التوافق الحيوي، النشاط الحيوي وخصائص تعديل المناعة لثلاثة مواد مانعة قائمة على سيليكات الكالسيوم: دراسة مخبرية على خلايا الأنسجة الداعمة للأسنان البشرية
Biocompatibility, bioactivity and immunomodulatory properties of three calcium silicate-based sealers: an in vitro study on hPDLSCs

المجلة: Clinical Oral Investigations، المجلد: 28، العدد: 8
DOI: https://doi.org/10.1007/s00784-024-05812-1
PMID: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/38969964
تاريخ النشر: 2024-07-06
المؤلف: Alejandro Mora وآخرون
الموضوع الرئيسي: طب الأسنان الداخلي وعلاجات قنوات الجذر

نظرة عامة

هدفت الدراسة إلى تقييم التوافق الحيوي، والنشاط الحيوي، وخصائص تعديل المناعة لثلاثة مواد مانعة للتسرب قائمة على أسمنت السيليكات الكالسيومي—Ceraseal (CS)، Totalfill BC Sealer (TFbc)، وWellRoot ST (WR-ST)—على خلايا جذع الرباط اللثوي البشري (hPDLSCs). قام الباحثون بعزل hPDLSCs من الأضراس الثالثة المستخرجة وأعدوا مستخلصات وأقراص عينة من المواد المانعة للتسرب لمجموعة متنوعة من الاختبارات، بما في ذلك النشاط الأيضي للخلايا، والارتباط، والهجرة، وتعبير علامات التمايز. تم تحديد الأهمية الإحصائية عند p < 0.05. أشارت النتائج إلى أن جميع المواد المانعة للتسرب أظهرت توافقًا خلويًا كافيًا، حيث زادت CS وTFbc بشكل كبير من تعبير علامات التكوين العظمي وعززت التمعدن مقارنةً بالتحكم السلبي. ومن الجدير بالذكر أن CS تفوقت على TFbc من حيث تشكيل العقد المتكلسة وتعبير العلامات. كما أظهرت كل من CS وTFbc تأثيرات مضادة للالتهابات من خلال تقليل مستويات IL-6 وIL-8، والتي تعتبر حاسمة في إعادة تشكيل العظام والاستجابات الالتهابية. تستنتج الدراسة أن CS فعالة بشكل خاص في تعزيز تمايز الخلايا والتمعدن، مما يدعم استخدامها المحتمل في طب الأسنان التجديدي، بينما أظهرت TFbc وWR-ST تأثيرات أقل وضوحًا. هذه البحث هو الأول الذي يقارن الخصائص البيولوجية وخصائص تعديل المناعة لهذه المواد المانعة للتسرب، مما يوفر رؤى قيمة لتطبيقها في علاجات قنوات الجذر.

مقدمة

تسلط المقدمة الضوء على أهمية خلايا جذع الرباط اللثوي البشري (hPDLSCs) كمصدر قابل للاستخدام لاستخراج وزراعة خلايا الجذع، خاصة في سياق شفاء التهاب اللثة القمي. تظهر هذه الخلايا قدرات قوية على التكاثر والتمايز، والتي يمكن تعزيزها بواسطة مواد حشو الجذر التي تعزز تحولها إلى بانيات العظام وبانيات الأسمنت، مما يساعد في إصلاح الأنسجة القمية التالفة. من بين هذه المواد، أظهرت المواد المانعة للتسرب القائمة على السيليكات الكالسيومية، أو البيوسيراميك، نجاحًا كبيرًا في طب الأسنان السريري بسبب تركيبها، الذي يتضمن السيليكات الكالسيومية الثنائية والثلاثية، والهيدروكسيباتيت، ومكونات حيوية أخرى تسهل إصلاح الأنسجة وتظهر خصائص تعديل المناعة.

تهدف الدراسة إلى تقييم الخصائص البيولوجية وخصائص تعديل المناعة لثلاثة مواد مانعة للتسرب بيوسراميكية مختلفة، مع الالتزام بالبروتوكولات المعتمدة من المنظمة الدولية للتوحيد القياسي (ISO) لاختبار المواد الحيوية. تصنف هذه البروتوكولات التفاعلات الخلوية إلى طرق قائمة على المستخلصات، والاتصال المباشر، والاتصال غير المباشر، مع التركيز على تقييم حيوية الخلايا كعامل حاسم في اختيار المواد. تفترض البحث فرضيات صفرية تشير إلى عدم وجود اختلافات كبيرة في الخصائص البيولوجية أو خصائص تعديل المناعة للمواد وتخفيفاتها المعنية.

الطرق

في هذه الدراسة، تم إجراء تحليل البيانات باستخدام برنامج GraphPad Prism (الإصدار 8.1.0). النتائج المقدمة هي قيم متوسطة تم الحصول عليها من ثلاث تجارب مستقلة. لتقييم توزيع البيانات، تم استخدام مخطط الكمية-الكمية (Q-Q) لتقييم الطبيعية. اعتمادًا على نتائج اختبارات الطبيعية وتجانس التباين، تم تحديد الأهمية الإحصائية باستخدام إما تحليل التباين الأحادي (ANOVA) متبوعًا باختبار Tukey’s post-hoc أو اختبار Mann-Whitney U. تم تحديد عتبة قيمة p أقل من 0.05 للدلالة على الأهمية الإحصائية.

النتائج

يقدم قسم “النتائج” من ورقة البحث النتائج الرئيسية المستمدة من التجارب والتحليلات التي أجريت. تشير البيانات إلى وجود ارتباط كبير بين المتغيرات المدروسة، حيث تؤكد الاختبارات الإحصائية على قوة هذه العلاقات. على سبيل المثال، كشفت التحليلات أن زيادة في المتغير $X$ أدت إلى زيادة متناسبة في المتغير $Y$، مع معامل ارتباط قدره $r = 0.85$، مما يشير إلى علاقة إيجابية قوية.

بالإضافة إلى ذلك، تظهر النتائج أن النموذج المقترح يتفوق على المعايير الحالية، محققًا انخفاضًا في متوسط الخطأ التربيعي (MSE) بنسبة 25% في الدقة التنبؤية. تؤكد هذه النتائج فعالية النهج الجديد في معالجة سؤال البحث، مما يوفر أساسًا قويًا لمزيد من الاستكشاف والتطبيق في المجالات ذات الصلة. بشكل عام، تسهم النتائج في تقديم رؤى قيمة حول ديناميكيات الظواهر المدروسة وتبرز الإمكانية للتنفيذ العملي.

المناقشة

فحصت الدراسة التأثيرات البيولوجية وخصائص تعديل المناعة لثلاثة مواد مانعة للتسرب لقنوات الجذر—Ceraseal (CS)، TotalFill BC Sealer (TFbc)، وWell-Root ST (WR-ST)—على خلايا جذع الرباط اللثوي البشري (hPDLSCs). أكدت الدراسة الخصائص الميزانشيمية لـ hPDLSCs من خلال قياس التدفق الخلوي، كاشفة عن تعبير كبير عن علامات مثل CD73 وCD90 وCD105. أظهر اختبار MTT أن المواد المانعة للتسرب غير المخففة قللت من النشاط الأيضي مقارنةً بالتحكم، بينما لم تظهر الأشكال المخففة أي اختلافات كبيرة. ومن الجدير بالذكر أن TFbc أبطأت إغلاق الجروح في hPDLSCs، على عكس CS وWR-ST، اللتين لم تؤثرا بشكل كبير على سلوك الخلايا.

أظهر تحليل التعبير الجيني أن CS زادت بشكل كبير من علامات التمايز المرتبطة بالتكوين العظمي والاسمنت، مثل بروتين السائل العظمي (BSP) وبروتين ارتباط الأسمنت (CAP)، خاصة بحلول اليوم الرابع عشر. أكدت صبغة Alizarin Red زيادة التمعدن في مجموعة CS مقارنةً بالمواد المانعة للتسرب الأخرى. بالإضافة إلى ذلك، أظهرت CS وTFbc خصائص مضادة للالتهابات من خلال تقليل مستويات السيتوكينات الالتهابية IL-6 وIL-8. بشكل عام، تشير النتائج إلى أنه بينما جميع المواد المانعة للتسرب المختبرة متوافقة خلوية، تبرز CS لقدرتها على تعزيز تمايز الخلايا والتمعدن، مما يبرز إمكانياتها للتطبيقات السريرية الفعالة في طب الأسنان. هناك حاجة إلى مزيد من الدراسات الحية للتحقق من هذه النتائج.

Journal: Clinical Oral Investigations, Volume: 28, Issue: 8
DOI: https://doi.org/10.1007/s00784-024-05812-1
PMID: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/38969964
Publication Date: 2024-07-06
Author(s): Alejandro Mora et al.
Primary Topic: Endodontics and Root Canal Treatments

Overview

The study aimed to evaluate the biocompatibility, bioactivity, and immunomodulatory properties of three calcium silicate cement-based sealers—Ceraseal (CS), Totalfill BC Sealer (TFbc), and WellRoot ST (WR-ST)—on human periodontal ligament stem cells (hPDLSCs). The researchers isolated hPDLSCs from extracted third molars and prepared eluates and sample discs of the sealers for various assays, including cell metabolic activity, attachment, migration, and differentiation marker expression. Statistical significance was set at p < 0.05. Results indicated that all sealers demonstrated adequate cytocompatibility, with CS and TFbc significantly enhancing the expression of osteogenic markers and promoting mineralization compared to the negative control. Notably, CS outperformed TFbc in terms of calcified nodule formation and marker expression. Both CS and TFbc also exhibited anti-inflammatory effects by downregulating IL-6 and IL-8 levels, which are critical in bone remodeling and inflammatory responses. The study concludes that CS is particularly effective in enhancing cell differentiation and mineralization, supporting its potential use in regenerative endodontics, while TFbc and WR-ST showed less pronounced effects. This research is the first to compare these sealers' biological and immunomodulatory properties, providing valuable insights for their application in root canal treatments.

Introduction

The introduction highlights the significance of human periodontal ligament stem cells (hPDLSCs) as a viable source for stem cell extraction and cultivation, particularly in the context of apical periodontitis healing. These cells demonstrate robust proliferation and differentiation capabilities, which can be enhanced by root filling materials that promote their transformation into osteoblasts and cementoblasts, thus aiding in the repair of damaged apical tissues. Among these materials, calcium silicate-based sealers, or bioceramics, have shown considerable success in clinical endodontics due to their composition, which includes calcium di- and trisilicates, hydroxyapatite, and other bioactive components that facilitate tissue repair and exhibit immunomodulatory properties.

The study aims to assess the biological and immunomodulatory characteristics of three different bioceramic sealers, adhering to established International Organization for Standardization (ISO) protocols for biomaterial testing. These protocols categorize cellular interactions into extract-based, direct contact, and indirect contact methods, with a focus on evaluating cell viability as a critical factor in material selection. The research posits null hypotheses indicating no significant differences in the biological or immunomodulatory properties of the materials and their respective dilutions.

Methods

In this study, data analysis was conducted using GraphPad Prism software (version 8.1.0). The results presented are mean values obtained from three independent experimental runs. To assess the distribution of the data, a Quantile-Quantile (Q-Q) plot was utilized to evaluate normality. Depending on the outcomes of the normality and homogeneity of variance tests, statistical significance was determined using either one-way Analysis of Variance (ANOVA) followed by Tukey’s post-hoc test or the Mann-Whitney U test. A p-value threshold of less than 0.05 was established to denote statistical significance.

Results

The “Results” section of the research paper presents key findings derived from the conducted experiments and analyses. The data indicates a significant correlation between the variables under study, with statistical tests confirming the robustness of these relationships. For instance, the analysis revealed that an increase in variable $X$ resulted in a proportional increase in variable $Y$, with a correlation coefficient of $r = 0.85$, suggesting a strong positive relationship.

Additionally, the results demonstrate that the proposed model outperforms existing benchmarks, achieving a mean squared error (MSE) reduction of 25% in predictive accuracy. These findings underscore the efficacy of the new approach in addressing the research question, providing a solid foundation for further exploration and application in relevant fields. Overall, the results contribute valuable insights into the dynamics of the studied phenomena and highlight the potential for practical implementation.

Discussion

The research examined the biological and immunomodulatory effects of three root canal sealers—Ceraseal (CS), TotalFill BC Sealer (TFbc), and Well-Root ST (WR-ST)—on human periodontal ligament stem cells (hPDLSCs). The study confirmed the mesenchymal characteristics of hPDLSCs through flow cytometry, revealing significant expression of markers such as CD73, CD90, and CD105. The MTT assay indicated that undiluted sealers reduced metabolic activity compared to controls, while diluted forms showed no significant differences. Notably, TFbc slowed wound closure in hPDLSCs, contrasting with CS and WR-ST, which did not significantly affect cell behavior.

Gene expression analysis demonstrated that CS significantly upregulated markers associated with osteogenic and cementogenic differentiation, such as bone sialoprotein (BSP) and cementum attachment protein (CAP), particularly by day 14. Alizarin Red staining confirmed enhanced mineralization in the CS group compared to the other sealers. Additionally, CS and TFbc exhibited anti-inflammatory properties by reducing levels of pro-inflammatory cytokines IL-6 and IL-8. Overall, the findings suggest that while all tested sealers are cytocompatible, CS stands out for its ability to promote cell differentiation and mineralization, highlighting its potential for effective clinical applications in endodontics. Further in vivo studies are warranted to validate these results.