الفعالية المضادة للطفيليات في المختبر لثلاثة مستخلصات نباتية ضد مراحل تطور مختلفة من هيمونشوس كونتورتوس
In vitro Anthelmintic Efficacy of Three Plant Extracts against Various Developmental Stages of Haemonchus contortus

المجلة: Pakistan Veterinary Journal
DOI: https://doi.org/10.29261/pakvetj/2024.174
تاريخ النشر: 2024-01-01
الموضوع الرئيسي: عدوى الديدان الطفيلية والسيطرة عليها

نظرة عامة

تدرس هذه الدراسة الإمكانات المضادة للطفيليات لاستخراجات أوراق من ثلاثة نباتات علفية—*Leucaena leucocephala*، *Moringa oleifera*، و*Acacia ampliceps*—ضد الديدان الطفيلية المعوية *Haemonchus contortus*، التي تؤثر بشكل كبير على المجترات الصغيرة في المناطق الاستوائية مثل باكستان. تسلط الأبحاث الضوء على المشكلة المتزايدة لمقاومة الأدوية المضادة للطفيليات بسبب الإفراط في استخدام المواد الكيميائية الاصطناعية، مما يستدعي استراتيجيات علاج بديلة. أظهر التحليل الكيميائي النباتي وجود مستخلصات ثانوية، وخاصة التانينات، الفلافونويدات، والمركبات الفينولية، والتي يُعتقد أنها تسهم في التأثيرات المضادة للطفيليات الملحوظة.

أظهرت التجارب في المختبر أن جميع المستخلصات أظهرت تثبيطًا كبيرًا يعتمد على الجرعة لفقس البيض، شلل اليرقات، وحركة البالغين من *H. contortus*. ومن الجدير بالذكر أن المستخلصات أظهرت فعالية متفاوتة، حيث حققت *Leucaena leucocephala* تثبيطًا بنسبة 70.3% لفقس البيض، بينما أدت *Moringa oleifera* إلى تثبيط بنسبة 66.6% لحركة اليرقات. تم تحديد الجرعات الفعالة (ED50) لتكون 0.285 لـ *Leucaena leucocephala*، 0.81 لـ *Moringa oleifera*، و0.245 لـ *Acacia ampliceps*. تشير هذه النتائج إلى أن هذه النباتات المستخدمة تقليديًا قد تمتلك خصائص مضادة للطفيليات كبيرة، مما يستدعي مزيدًا من البحث في ملفاتها الكيميائية النباتية وإمكاناتها للتطبيقات الحية.

مقدمة

تشكل الديدان الطفيلية المعوية (GINs)، وخاصة *Haemonchus (H.) contortus*، تحديات كبيرة لإنتاج المجترات، خاصة في المناطق الاستوائية حيث تكون شائعة. هذه الأنواع تعتبر مسببة للأمراض بشكل ملحوظ، مما يؤدي إلى خسائر اقتصادية كبيرة في الثروة الحيوانية بسبب ضعف الإنتاج وارتفاع معدلات الوفيات، خاصة في دول مثل باكستان (Besier et al., 2016; Kuiseu et al., 2021). تاريخيًا، كانت الأدوية المضادة للطفيليات الاصطناعية هي العلاج الرئيسي لعدوى GIN؛ ومع ذلك، أدى الإفراط في استخدام هذه الأدوية التقليدية إلى زيادة ملحوظة في السكان المقاومين للأدوية المضادة للطفيليات من *H. contortus* (Lamb et al., 2017). تعقد هذه المقاومة تدابير السيطرة وتهدد الأمن الغذائي من خلال تقويض صحة وإنتاجية الثروة الحيوانية.

طرق

في قسم “الطرق”، توضح الدراسة الإجراءات الخاصة بتحديد النباتات واستخراجها، مع التركيز على ثلاثة أنواع: *Leucaena leucocephala*، *Acacia ampliceps*، و*Moringa oleifera*. تم جمع هذه النباتات من مزرعة باهدرناغار في أوكارا وتم التعرف عليها في قسم علم النبات، جامعة الحكومة، لاهور. تم شطف الأوراق، وتجفيفها في الظل، وطحنها إلى مسحوق، حيث تم استخراج حوالي 75 جرامًا من كل مسحوق باستخدام مذيب ميثانول-ماء (70:30) في جهاز سوكسليت. تم حساب عائد الاستخراج باستخدام الصيغة \( \text{Yield} = \frac{w_1 \times 100}{w_2} \)، حيث \( w_1 \) هو الوزن الجاف للاستخراج و\( w_2 \) هو وزن مسحوق النبات. تم توحيد المستخلصات إلى 100 ملغ/مل في ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) وتم تخزينها عند 4ºم للتحليل المستقبلي.

تم إجراء الفحص الكيميائي النباتي باستخدام بروتوكولات معتمدة مختلفة. تم تقدير التانينات باستخدام طريقة التقدير الحجمي، وتم تقييم المركبات الفينولية عبر طريقة فولين-سيوكالتو، وتم تقدير الفلافونويدات باستخدام طريقة قياس اللون بالكلوريد الألمنيوم. بالإضافة إلى ذلك، تم تحديد نسبة البروتين الخام باستخدام طريقة كيلدال، كما أشار كاسكا ومامادوف (2019). توفر هذه المنهجيات نهجًا شاملاً لتحليل التركيب الكيميائي النباتي للأنواع النباتية المختارة.

نتائج

يقدم قسم “النتائج” من ورقة البحث النتائج الرئيسية المستمدة من التجارب أو التحليلات التي تم إجراؤها. عادةً ما يتضمن بيانات كمية، وتحليلات إحصائية، وتمثيلات بصرية مثل الرسوم البيانية أو الجداول التي توضح نتائج الدراسة. غالبًا ما تتم مقارنة النتائج مع الفرضيات أو الأهداف الأولية الموضحة في المقدمة، مما يبرز الاتجاهات المهمة، والارتباطات، أو الشذوذات الملحوظة أثناء البحث.

علاوة على ذلك، قد يناقش القسم تداعيات النتائج، مع التأكيد على أهميتها في المجال الأوسع للدراسة. كما يتم تناول أي قيود واجهت أثناء عملية البحث، بالإضافة إلى المجالات المحتملة للتحقيقات المستقبلية، لتوفير فهم شامل للنتائج وسياقها ضمن الأدبيات الموجودة.

مناقشة

تسلط المناقشة الضوء على القضية الملحة لمقاومة الأدوية المضادة للطفيليات في الثروة الحيوانية، وخاصة ضد الدودة الطفيلية *Haemonchus contortus*، التي تشكل تحديات اقتصادية كبيرة في صناعة المجترات الصغيرة. تؤكد الدراسة على الحاجة إلى استراتيجيات علاج بديلة، خاصة من خلال استكشاف المركبات النشطة بيولوجيًا المستندة إلى النباتات. أظهرت النباتات الثلاثة التي تم التحقيق فيها—*Leucaena leucocephala*، *Moringa oleifera*، و*Acacia ampliceps*—درجات متفاوتة من النشاط المضاد للطفيليات، حيث أظهرت *L. leucocephala* أعلى فعالية في تثبيط فقس البيض، بينما أظهرت *M. oleifera* تأثيرات كبيرة على حركة اليرقات. تشير النتائج إلى أن الملفات الكيميائية النباتية، وخاصة وجود الفلافونويدات، التانينات، والمركبات الفينولية، تلعب دورًا حاسمًا في الخصائص المضادة للطفيليات لهذه النباتات.

تشير النتائج إلى أن النشاط المضاد للطفيليات لمستخلصات النباتات يعتمد على التركيز والوقت، حيث كانت *L. leucocephala* و*M. oleifera* فعالتين بشكل خاص ضد مراحل التطور المختلفة من *H. contortus*. على الرغم من أن الأدوية المضادة للطفيليات الاصطناعية مثل الألبندازول أظهرت فعالية أعلى، فإن الدراسة تؤكد على إمكانات هذه المستخلصات النباتية كبدائل مستدامة. يدعو المؤلفون إلى مزيد من البحث لتحسين طرق الاستخراج والتركيبات، مما قد يعزز التطبيقات العلاجية لهذه المنتجات الطبيعية في إدارة العدوى الطفيلية في الثروة الحيوانية، وبالتالي المساهمة في ممارسات الزراعة المستدامة.

Journal: Pakistan Veterinary Journal
DOI: https://doi.org/10.29261/pakvetj/2024.174
Publication Date: 2024-01-01
Primary Topic: Helminth infection and control

Overview

This study investigates the anthelmintic potential of leaf extracts from three forage plants—Leucaena leucocephala, Moringa oleifera, and Acacia ampliceps—against the gastrointestinal nematode Haemonchus contortus, which significantly impacts small ruminants in tropical regions like Pakistan. The research highlights the growing issue of anthelmintic resistance due to the overuse of synthetic chemicals, necessitating alternative treatment strategies. Phytochemical analysis revealed the presence of secondary metabolites, particularly tannins, flavonoids, and phenolic compounds, which are believed to contribute to the observed anthelmintic effects.

In vitro assays demonstrated that all extracts exhibited significant, dose-dependent inhibition of egg hatching, larval paralysis, and adult motility of H. contortus. Notably, the extracts showed varying efficacy, with Leucaena leucocephala achieving a 70.3% inhibition of egg hatching and Moringa oleifera resulting in a 66.6% inhibition of larval motility. The effective doses (ED50) were determined to be 0.285 for Leucaena leucocephala, 0.81 for Moringa oleifera, and 0.245 for Acacia ampliceps. These findings suggest that these traditionally used plants may possess significant antiparasitic properties, warranting further investigation into their phytochemical profiles and potential for in vivo applications.

Introduction

Gastrointestinal nematodes (GINs), particularly Haemonchus (H.) contortus, pose significant challenges to ruminant production, especially in tropical regions where they are prevalent. This species is notably pathogenic, leading to severe economic losses in livestock due to impaired production and high mortality rates, particularly in countries like Pakistan (Besier et al., 2016; Kuiseu et al., 2021). Historically, synthetic anthelmintics have been the primary treatment for GIN infections; however, the overuse of these conventional dewormers has resulted in a marked increase in anthelmintic-resistant populations of H. contortus (Lamb et al., 2017). This resistance complicates control measures and threatens food security by undermining livestock health and productivity.

Methods

In the “Methods” section, the study details the procedures for plant identification and extraction, focusing on three species: *Leucaena leucocephala*, *Acacia ampliceps*, and *Moringa oleifera*. These plants were collected from Bahadurnagar farm in Okara and identified at the Department of Botany, Government College University, Lahore. The leaves were rinsed, shade-dried, and ground into powder, with approximately 75g of each powder extracted using a methanol-water (70:30) solvent in a Soxhlet apparatus. The extraction yield was calculated using the formula \( \text{Yield} = \frac{w_1 \times 100}{w_2} \), where \( w_1 \) is the dried weight of the extract and \( w_2 \) is the weight of the plant powder. The extracts were standardized to 100 mg/ml in Dimethyl Sulfoxide (DMSO) and stored at 4ºC for future analysis.

Phytochemical screening was conducted using various established protocols. Tannins were quantified using a titrimetric method, phenolic compounds were assessed via the Folin-Ciocalteu method, and flavonoids were estimated using the aluminum chloride colorimetric method. Additionally, the crude protein percentage was determined using the Kjeldahl method, as referenced by Kaska and Mammadov (2019). These methodologies provide a comprehensive approach to analyzing the phytochemical composition of the selected plant species.

Results

The “Results” section of the research paper presents the key findings derived from the conducted experiments or analyses. It typically includes quantitative data, statistical analyses, and visual representations such as graphs or tables that illustrate the outcomes of the study. The results are often compared against the initial hypotheses or objectives outlined in the introduction, highlighting significant trends, correlations, or anomalies observed during the research.

Furthermore, the section may discuss the implications of the findings, emphasizing their relevance to the broader field of study. Any limitations encountered during the research process, as well as potential areas for future investigation, are also addressed to provide a comprehensive understanding of the results and their context within the existing literature.

Discussion

The discussion highlights the pressing issue of anthelmintic resistance in livestock, particularly against the parasitic nematode *Haemonchus contortus*, which poses significant economic challenges in the small ruminant industry. The study emphasizes the need for alternative therapeutic strategies, particularly through the exploration of plant-based bioactive compounds. The three plants investigated—*Leucaena leucocephala*, *Moringa oleifera*, and *Acacia ampliceps*—demonstrated varying degrees of anthelmintic activity, with *L. leucocephala* showing the highest efficacy in inhibiting egg hatching and *M. oleifera* exhibiting significant effects on larval motility. The findings suggest that the phytochemical profiles, particularly the presence of flavonoids, tannins, and phenolic compounds, play a crucial role in the anthelmintic properties of these plants.

The results indicate that the anthelmintic activity of the plant extracts is concentration- and time-dependent, with *L. leucocephala* and *M. oleifera* being particularly effective against different developmental stages of *H. contortus*. Although synthetic anthelmintics like albendazole demonstrated superior efficacy, the study underscores the potential of these plant extracts as sustainable alternatives. The authors advocate for further research to optimize extraction methods and formulations, which could enhance the therapeutic applications of these natural products in managing parasitic infections in livestock, thereby contributing to sustainable agricultural practices.