رقم التجربة السريرية غير قابل للتطبيق.
الكلمات الرئيسية إيلونوستينيب، زينريليا السلامة، كلب، فموي

إيلانكو لصحة الحيوان، مركز ياراندو للأبحاث والتطوير، كيمبس كريك، سيدني 2178، أستراليا
إيلانكو لصحة الحيوان، كريسكو أونو، مبنى C، 3-5 شارع الكريستال، صندوق بريد 80022-92317، سيفر سيدكس، فرنسا

تعتبر اضطرابات الجلد من بين الأسباب الأكثر شيوعًا التي تدفع أصحاب الحيوانات الأليفة للبحث عن الرعاية البيطرية، حيث يُعد الحكة عرضًا مزعجًا بشكل خاص يقلل بشكل كبير من جودة الحياة لكل من الكلاب وأصحابها [1]. التهاب الجلد التأتبي هو حالة التهابية شائعة تؤثر على حوالي من سكان الكلاب. إنه سبب رئيسي للحكة، وأحد الأسباب الأكثر شيوعًا التي تؤدي إلى زيارة الأطباء البيطريين [2،3]. إن مسببات التهاب الجلد التأتبي في الكلاب معقدة. فهي تشمل عوامل وراثية، واضطراب في حاجز الجلد، وت disruption في ميكروبيوم الجلد، واضطراب المناعة، وحساسية تجاه المواد المسببة للحساسية [4]. في الكلاب، أظهرت الدراسات وجود علاقة قوية بين التهاب الجلد التأتبي والطفرات الوراثية. ومع ذلك، فإن المرض متعدد العوامل، والبيئة تلعب دورًا مهمًا. تشمل الأسباب الملحوظة الأخرى للحكة التهاب الجلد الناتج عن حساسية البراغيث، والحساسية الغذائية، والجرب الساركوبتي. الحكة ليست مجرد عرض؛ بل إنها تزيد من تفاقم الحالات التحسسية من خلال تعطيل حاجز الجلد بشكل متكرر، مما يسهل دخول المواد المسببة للحساسية، والبكتيريا، والخمائر. لذلك، فإن معالجة الحكة ليست مجرد تخفيف للأعراض، بل تعتبر أيضًا استراتيجية علاجية سببية.
تشمل المشهد الدوائي لإدارة الحالات التحسسية والحكة في الكلاب عدة عائلات من الأدوية مثل الجلوكوكورتيكويدات، مثبطات الكالسينيورين (مثل سيكلوسبورين أ)، مثبطات جانوس كيناز (JAKi)، والأجسام المضادة أحادية النسيلة المضادة لـ IL-31 (mAb). بينما تعتبر العديد من هذه العلاجات فعالة، إلا أنها قد تأتي مع آثار جانبية غير مرغوب فيها، مثل تلك التي لوحظت مع الجلوكوكورتيكويدات، أو قد تخفف الحكة دون معالجة الالتهاب الأساسي، كما هو الحال مع الأجسام المضادة أحادية النسيلة المضادة لـ IL-31. لقد اقتصر السوق البيطري على مثبط جانوس كيناز واحد، وهو أوكلاسيتي nib، لعلاج التهاب الجلد التأتبي الكلبي والحكة المرتبطة به، بينما تتوفر في الطب البشري مجموعة أوسع من مثبطات جانوس كيناز لمجموعة واسعة من الحالات المناعية.
إيلونوستينيب، وهو مثبط جديد لجين جيناز، تم تقديمه مؤخرًا في مجال الطب البيطري تحت اسم زينريليا. ، مما يوفر خيارًا جديدًا لإدارة الحكة المرتبطة بالتهاب الجلد التحسسي والتهاب الجلد التأتبي في الكلاب. أظهرت الدراسات فعاليته بخصائص دوائية مناسبة للجرعة اليومية الواحدة، مما يضمن مستويات علاجية مستدامة [7-9].
تهدف هذه الدراسة إلى تقييم ملف الأمان لدواء إيلونوستينيب في الكلاب عند إعطائه مرة واحدة يوميًا، على مدى 6 أشهر في ومستويات جرعة زائدة متعددة (1.6 (2X)، 2.4 و علاوة على ذلك، يجب تقييم سلامة أي دواء بيطري جديد في الأنواع المستهدفة لتلبية المتطلبات التنظيمية.

تم إجراء هذه الدراسة المخبرية بالإشارة إلى الإرشادات الخاصة بتقييم سلامة الحيوانات المستهدفة للأدوية الجديدة (إرشادات VICH 43) [10]، ووفقًا لممارسات المختبر الجيدة [11-12]. تم مراجعة بروتوكول الدراسة والموافقة عليه من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوانات في المنشأة الاختبارية، وتمت الدراسة وفقًا للقواعد النهائية للوائح قانون رفاهية الحيوانات ودليل رعاية واستخدام الحيوانات المخبرية [13-14]. تم إعداد هذه المخطوطة وفقًا لقائمة التحقق من إرشادات ARRIVE للتجارب الحيوانية في الجسم الحي [15].

تم تكييف 22 كلبًا من نوع بيجل ذكور و22 أنثى، تم شراؤها من مورد حيوانات مختبرية (إنفيغو الولايات المتحدة) وتبلغ أعمارها حوالي 11 إلى 12 شهرًا، لمدة تقارب 3 أسابيع. بعد الفحوصات البيطرية وتقييمات علم الأمراض السريرية، تم اختيار 20 ذكرًا و20 أنثى (تتراوح أوزانهم بين 8.8 إلى 12.4 كجم و5.5 إلى 11.2 كجم، على التوالي، عند التوزيع العشوائي) وتم تخصيصهم لمجموعات التحكم أو العلاج في اليوم -1 من الدراسة.
تم إيواء الكلاب في أزواج (حيوانان/قفص من نفس الجنس) منذ وصولها حتى اليوم -3 من الدراسة، ثم تم إيواؤها بشكل فردي طوال مدة الدراسة في أقفاص متنقلة من الفولاذ المقاوم للصدأ مع أرضيات مغطاة بالبولي إيثيلين على شكل ماسة تحتوي على تحسينات للحيوانات. خلال مدة الدراسة بأكملها، كانت المياه الجارية متاحة بحرية، وتم تقديم نظام غذائي جاف مختبري يوميًا للحيوانات. النظام الغذائي المعتمد للكلاب #5007) وطعام معلب رطب لذيذ (Royal Canin Veterinary Diet Recovery RS). في أيام الجرعات (من اليوم 1 إلى 182 من الدراسة)، تم علاج الكلاب في ظروف تغذية، أي أن الكلاب كانت صائمة طوال الليل وتم تقديم الطعام المعلب لها. قبل إعطاء القرص. تم تقديم الحصة اليومية من الطعام الجاف بعد 1 إلى 2 ساعة من الجرعة.

كانت هذه دراسة عشوائية محكومة مزدوجة التعمية لمدة 6 أشهر بتصميم متوازي. باستخدام إجراء عشوائي كتلي مصنف حسب الجنس، تم تخصيص 20 ذكراً و20 أنثى عشوائياً في يوم الدراسة -3 إلى واحدة من المجموعات الخمس التالية (4 ذكور و4 إناث لكل مجموعة): المجموعة 1: مجموعة التحكم غير المعالجة (تم إعطاؤها 5 مل من ماء الصنبور كعلاج وهمي)؛ المجموعة 2: أقراص إيلونوستينيب المغلفة بفيلم بجرعة مستهدفة من ; المجموعة 3: أقراص إيلونوستينيب المغلفة بطبقة فيلم بجرعة مستهدفة من كجم (2X)؛ المجموعة 4: أقراص إيلونوستينيب المغلفة بطبقة عند مستوى جرعة مستهدف المجموعة 5: أقراص إيلونوستينيب المغلفة بطبقة فيلم بجرعة مستهدفة من كانت الوحدة التجريبية هي الكلب الفردي.
باستثناء الأفراد الذين يقومون بإدارة العلاجات أو الذين لديهم أدوار غير مرتبطة بجمع البيانات،
تم إخفاء جميع الأفراد الآخرين عن تعيينات مجموعة العلاج.

تم اختيار مستويات الجرعة بناءً على الجرعة العلاجية القصوى (أي ) ومتطلبات اختبار مضاعفات الجرعة العلاجية القصوى، أي و5 أضعاف الجرعة العلاجية. كانت الجرعات لكل حيوان فردي تعتمد على أحدث وزن جسم. أقراص إيلونوسيتينيب التجارية، المتاحة في تم صرف أقراص بتركيز 15 ملغ. تم دمج هذه الأقراص بشكل مناسب لتلبية متطلبات الجرعة الدقيقة للفرد، مما يضمن عدم حدوث نقص في الجرعة. تم إعطاء هذه الأقراص عن طريق الفم، مرة واحدة في اليوم، على مدى فترة 6 أشهر، من اليوم الأول للدراسة حتى اليوم 182. تم إعطاء حوالي 5 مل من الماء بعد كل جرعة وتم فحص الفم للتأكد من أن الأقراص قد تم ابتلاعها. تم علاج الحيوانات الضابطة بشكل وهمي باستخدام 5 مل من ماء الصنبور. نظرًا لأن تعرض الإيلونوستينيب قد أظهر أنه يزداد مع الطعام، تم إطعام الكلاب خلال 30 دقيقة قبل كل جرعة.

تمت مراقبة الحيوانات مرتين يوميًا، بفارق زمني لا يقل عن 6 ساعات، على مدار فترة الدراسة بأكملها لرصد الأمراض والوفيات والإصابات. تم إجراء الفحوصات السريرية لكل كلب قبل إعطاء العلاج وحوالي 2 و5 ساعات بعد العلاج. شملت الملاحظات، ولكن لم تقتصر على، تقييم الجلد، الفراء، العيون، الأذنين، الأنف، تجويف الفم، الصدر، البطن، الأعضاء التناسلية الخارجية، الأطراف والقدمين، علامات التنفس والدورة الدموية، التأثيرات اللاإرادية مثل إفراز اللعاب، وتأثيرات الجهاز العصبي بما في ذلك الاهتزازات، التشنجات، التفاعل مع التعامل، والسلوك غير المعتاد.
تم تسجيل أوزان الجسم لجميع الحيوانات خلال مرحلة التكيف (أيام الدراسة -12 و -1) ثم مرة واحدة أسبوعياً خلال الدراسة. تم قياس وتسجيل استهلاك الطعام (الطعام الجاف والرطب) يومياً. تم إجراء فحوصات جسدية كاملة بواسطة طبيب بيطري مرة واحدة خلال التكيف وكل أسبوعين خلال مرحلة الجرعات في أيام الدراسة. ، 126، 140، 154، 168 و 182. شملت التقييمات الحالة العامة والسلوك، الفحص العيني، الجلد، الجهاز العضلي الهيكلي، الجهاز الهضمي، درجة حرارة الجسم، الجهاز القلبي الوعائي والجهاز التنفسي بما في ذلك التقييم القائم على السمع، والجهاز التناسلي، والجهاز اللمفاوي، والجهاز البولي والجهاز العصبي. تم إجراء الفحوصات العصبية مرة واحدة خلال فترة التكيف في اليوم السادس من الدراسة وفي اليوم 182 من الدراسة بما في ذلك تقييم الموقف العام، السلوك، الوظيفة الحركية، الأعصاب القحفية (الرأرأة، استجابة البؤبؤ)، ردود الفعل الحسية والوضعية، والأعصاب الشوكية. تم إجراء الفحوصات باستخدام منظار قاع العين بواسطة طبيب عيون معتمد من المجلس على جميع الحيوانات في اليومين -4 و 182 من الدراسة.

تم جمع عينات الدم من الوريد الوداجي لتقييم متغيرات علم الدم، الكيمياء السريرية، والتخثر في وقت ما قبل الاختبار، وفي أيام الدراسة 29، 57، 85، 113، 141، 169 و183. تم إدراج مجموعة كاملة من معايير علم الأمراض السريرية (علم الدم، كيمياء الدم، وتحليل البول) وفقًا لإرشادات VICH 43 [10] في الجدول 1. تم جمع عينات البول باستخدام صواني فولاذية وضعت تحت الأقفاص لمدة لا تقل عن 16 ساعة في نفس النقاط الزمنية.
تم جمع عينات الدم الكامل أيضًا من الوريد الوداجي لتقييم مجموعات الكريات البيضاء والأنماط الظاهرية في أيام الدراسة -16 و -8 ، وفي أيام الدراسة و 183. شمل تصنيف النمط المناعي بواسطة تحليل تدفق الخلايا اللمفاوية إجمالي الخلايا اللمفاوية التائية (CD45 + CD5 + أو CD5 + T cells)، والخلايا اللمفاوية التائية المساعدة (CD45+CD5+CD4+ أو CD4+Th cells)، والخلايا اللمفاوية التائية السامة (CD45 + CD5 + CD8 + أو CD8 + Tc cells)، والخلايا اللمفاوية البائية (CD45 + CD5- CD21 + أو CD21 + B cells) والوحيدات (CD45 + CD14+).

تم جمع عينات الدم (1 مل) من جميع الحيوانات عبر الوريد الوداجي لتحديد تركيزات البلازما من الإيلونوسيتينيب. تم جمع العينات قبل الجرعة وفي و 24 ساعة بعد الجرعة في يوم الجرعة الأولى والأخيرة (أيام الدراسة 1 و 182) وفي وقت ما قبل الجرعة و1 و24 ساعة بعد الجرعة في يوم الدراسة 85. تم جمع عينات الدم في أنابيب تحتوي على EDTA. تم معالجة الدم إلى بلازما خلال ساعة واحدة من الجمع وتم تخزين عينات البلازما مجمدة عند حتى يتم التحليل. تم تحديد تركيزات البلازما من الإيلونوسيتينيب باستخدام طريقة كروماتوغرافيا السائل-مطياف الكتلة المت tandem (LC-MS/MS) المعتمدة وفقًا لإرشادات الصناعة [16-17].
تمت معالجة البيانات البيواناليتكية كملفات تركيز فردية مقابل الزمن باستخدام تحليل غير مقسم (NCA). تم إجراء الحسابات باستخدام برنامج Phoenix WinNonlin (الإصدار 8.3؛ Certara، الولايات المتحدة الأمريكية). تم اشتقاق Tmax و Cmax من القيم المرصودة. تم حساب AUCs باستخدام طريقة Linear Up Log Down. بالإضافة إلى ذلك، تم حساب T1/2 باستخدام طريقة أفضل ملاءمة وتم تقييم تأثيرات الجرعة والزمن والجنس بناءً على نسب Cmax و AUClast.

عند انتهاء الدراسة (اليوم 183 من الدراسة)، تم euthanize الكلاب بشكل إنساني عن طريق حقن وريدي لمحلول بنتوباربيتال صوديوم/فينيتوين تحت التخدير مع تيلازول حقن تحت الجلد (تيليتامين/زولازيبام). تم إجراء فحوصات شاملة وميكروسكوبية على جميع الحيوانات بواسطة أخصائي علم الأمراض البيطرية المعتمد.

تم إجراء جميع التحليلات الإحصائية باستخدام برنامج SAS البرمجيات (الإصدار 9.4، TS1M6 SAS/STAT 15.1، حقوق الطبع والنشر © 2002-2012 من قبل معهد ساس، كاري، نورث كارولينا، الولايات المتحدة الأمريكية).
تم تحليل النقاط النهائية التي تم قياسها مرة واحدة بعد العلاج (أوزان الأعضاء) والتي لم تتضمن قياسًا قبل العلاج باستخدام تحليل التباين (ANOVA) مع ‘العلاج’ و ‘الجنس’ و ‘العلاج حسب الجنس’ كعوامل ثابتة.
تم تحليل النقاط النهائية التي تم قياسها عدة مرات بعد العلاج والتي شملت قياسًا قبل العلاج (كيمياء المصل، بروتين سي التفاعلي، التخثر، علم الدم، تحليل البول، وزن الجسم، تغييرات وزن الجسم واستهلاك الطعام) باستخدام تحليل التباين المتكرر (RMANCOVA) مع ‘العلاج’ و ‘الوقت’ و ‘الجنس’؛ والتفاعلات الثنائية ‘العلاج حسب الوقت’ و ‘العلاج حسب الجنس’ و ‘الجنس حسب الوقت’؛ والتفاعل الثلاثي ‘العلاج حسب الوقت حسب الجنس’ واعتبار متغير ثابت. تم استخدام آخر قيمة متاحة قبل العلاج كمتغير ثابت.
إذا كانت حدود التفاعل ذات دلالة مستوى للتفاعلات الثنائية و للتفاعل الثلاثي)، تم مقارنة المجموعات المعالجة مع المجموعة الضابطة إما داخل كل جنس (تأثير المعالجة حسب الجنس ذو دلالة)، أو داخل كل نقطة زمنية (تأثير المعالجة حسب الوقت ذو دلالة) أو تأثير رئيسي فقط (لا تأثير للمعالجة حسب الجنس ولا تأثير للمعالجة حسب الوقت ذو دلالة).

لتحليل التصنيف المناعي/كريات الدم البيضاء في الدم المحيطي، تم إجراء نموذج مختلط خطي عام لتحليل التباين للقياسات المتكررة (نموذج مختلط). بالنسبة لكل نقطة نهاية، اختبر النموذج تأثيرات العلاج، الوقت، الجنس وجميع التفاعلات الثنائية والثلاثية. تم تضمين آخر قيمة متاحة قبل العلاج في النموذج كمتغير مصاحب. تم إجراء التقييم كما هو موضح في RMANCOVA.

خلال فترة الجرعات في الدراسة، كانت الجرعات المتوسطة من إيلونوسيتينيب الممنوحة لـ ، و 5 × ، كانت و على التوالي، وتم تحقيق معدل الجرعة المستهدف المخطط له لجميع الحيوانات المعالجة في جميع الأيام.

كانت جميع الحيوانات في صحة جيدة طوال مدة الدراسة وأكملت الدراسة. لم تكن هناك آثار جانبية خطيرة خلال فترة الدراسة.
كشفت الملاحظات السريرية المتعلقة بالمقالة الاختبارية عن وجود يعتمد على الجرعة من التهاب الجريبات الشعرية بين الأصابع، أو الكيسات (الجدول 2)، مع أو بدون إفرازات على واحدة أو أكثر من الأقدام. كما تم ملاحظة آفات جلدية أقل مثل التورم العرضي أو القشور على الأقدام، بالإضافة إلى سماكة و/أو تغير لون جلد الأقدام.

لم تكن هناك أي نتائج عينية أو عصبية مرتبطة بالعلاج.

خلال الدراسة، كان متوسط وزن الجسم (± خطأ معياري) للكلاب الضابطة هو بينما كانت الأوزان الجسمية المتوسطة في مجموعات العلاج كما يلي: في مجموعة 1 X، في مجموعة 2 X، في مجموعة 3 X، و في مجموعة 5 X. كانت زيادة وزن الجسم للكلاب الضابطة ، مقارنة بـ في مجموعة 1 X، في مجموعة 2 X، في مجموعة 3 X، و في مجموعة 5 X. لوحظ تأثير رئيسي ذو دلالة إحصائية للعلاج على وزن الجسم مع زيادات ذات دلالة إحصائية في وتأثير رئيسي ذو دلالة إحصائية للعلاج لوحظ على تغيير وزن الجسم ( ) مع زيادات ذات دلالة إحصائية عند 3 أضعاف و 5 أضعاف. أظهر متوسط استهلاك الطعام اليومي الأسبوعي دلالة إحصائية ( التفاعل بين الوقت والعلاج.

تُعرض بيانات الملخص للمعايير المختارة في علم الدم وكيمياء السرير في الجدول 3؛ الأشكال 1 و2 و3.
آثار العلاج ذات دلالة إحصائية للهيموغلوبين ( الهيماتوكريت ) وعدد كريات الدم الحمراء (RBC؛ تم ملاحظة انخفاض طفيف في متوسط الهيموغلوبين للذكور والإناث مجتمعة عند 2X و3X و5X، وانخفاض طفيف إلى معتدل في متوسط الهيماتوكريت وعدد كريات الدم الحمراء للذكور والإناث مجتمعة عند 3X و5X، مقارنة بالمتوسطات الضابطة. بدأت هذه الفروقات من اليوم 29 من الدراسة واستمرت حتى اليوم 183 من الدراسة. في الوقت نفسه، كان هناك تفاعل زمني كبير مع العلاج بالنسبة لمتوسط الهيموغلوبين الكروي (MCH؛ ) وتأثير رئيسي كبير للعلاج على تركيز الهيموغلوبين الكروي الوسيط (MCHC؛ بسبب انخفاض متوسط MCH بشكل طفيف عند 3X و 5X وانخفاض متوسط MCHC بشكل طفيف عند 2X و 3X و 5X.
أظهرت الخلايا الحمضية تفاعلًا كبيرًا بين الجنس والعلاج ( ) في الإناث. بالنسبة للإناث، كانت مجموعات العلاج عند 3X و 5X لديها متوسطات أقل مقارنة بالمجموعة الضابطة من أيام الدراسة 29 إلى 183. لم تكن هناك تأثيرات مرتبطة بالعلاج على اللمفاويات، وحيدات النواة، القاعديات، والرتق الخلوي. كان لدى كلبين في مجموعة 5X نسب نخاعية: كريات حمراء أقل بشكل طفيف.
كان هناك تأثير علاجي كبير للفبرينوجين ( ) بجرعات 3X و 5X، مع تركيزات مرتفعة قليلاً من أيام الدراسة 57 إلى 183. بينما ظلت المعلمات الأخرى للتخثر (وقت البروثرومبين ووقت الثرومبوبلاستين الجزئي المنشط) ضمن النطاق المرجعي طوال فترة الدراسة.
كانت قيم البروتين الكلي كبيرة بشكل ملحوظ ( ) أعلى في الذكور عند ، و5 X وأظهرت تفاعلًا زمنيًا كبيرًا حسب العلاج ،

تميزت بزيادة طفيفة في المتوسطات في يوم الدراسة 113 عند 3 مرات وفي أيام الدراسة 85 و113 و141 عند 5 مرات.
كان هناك تأثير رئيسي كبير للعلاج على الألبومين )، مع تركيز ألبومين متوسط أقل قليلاً عند جرعات 3X و 5X بدءًا من اليوم 57 من الدراسة. كان هناك تفاعلات ثلاثية مهمة بين الجلوبولين ونسبة الألبومين/الجلوبولين ( و على التوالي). كانت تركيزات الجلوبولين المتوسطة أعلى قليلاً وكانت نسب الألبومين/الجلوبولين المتوسطة أقل قليلاً إلى معتدلة مقارنة بالمتوسطات الضابطة لدى الذكور في ، و 5 X وفي الإناث عند 5 X بدءًا من يوم الدراسة 57، 85، أو 113 واستمرت حتى يوم الدراسة 183. لم تُلاحظ أي تغييرات في الفوسفاتاز القلوي، الألانين أمينوترانسفيراز، الأسبارتات أمينوترانسفيراز، الدهون الثلاثية، مستوى الكرياتينين في البلازما واليوريا أو أي معلمات كيميائية سريرية أخرى مدرجة في الجدول 1، جميعها تبقى ضمن النطاقات الطبيعية لمجموعات العلاج.
لم تكن هناك تأثيرات متعلقة بالمقالة الاختبارية على نقاط نهاية تحليل البول في أي من الجنسين عند أي مستوى جرعة.

لم تكن هناك أي تأثيرات متعلقة بمقالة الاختبار على معايير تحليل الكريات البيضاء (التصنيف المناعي) في أي من الجنسين عند أي مستوى جرعة.

كان هناك تأثير علاجي رئيسي واحد يتعلق بانخفاض أوزان الغدد الكظرية المجمعة في الذكور المعالجين بجرعات 2X و 5X، بينما لم تتغير أوزان الذكور عند جرعات 1X و 3X مقارنةً بالمجموعة الضابطة. على النقيض من ذلك، كانت أوزان الغدد الكظرية المجمعة لدى الإناث عند جرعة 3X مرتفعة. وزن البروستاتا ( وزن البروستاتا كنسبة مئوية من وزن الجسم ونسبة وزن البروستاتا إلى وزن الدماغ كانت منخفضة بشكل ملحوظ في مجموعة 5X مقارنةً بالمجموعة الضابطة.
تم تسجيل الملاحظات الماكروسكوبية التي تؤثر على 11 حيوانًا عبر جميع المجموعات في نهاية الدراسة. أظهر حيوانان (0 X و 2 X) سماكة أحادية في صيوان الأذن اليسرى، مما يتماشى مع إصابة موضعية واعتُبرت غير مرتبطة بالعلاج. كانت هناك أعداد قليلة من النتائج العرضية، بما في ذلك حالة واحدة من تضخم الغدة الدرقية/الغدد جارات الدرقية في أنثى واحدة.

تمت معالجتها بجرعة 1X، ووجود آفتين بؤريتين على رئتي الحيوانات المعالجة بجرعة 5X.
أظهرت الحيوانات الستة المتبقية تغييرات في الجلد فقط، بعضها مع تضخم في العقد اللمفاوية التصريفية، تم تفسيرها على أنها استجابات طبيعية للالتهاب الجلدي. كان لدى حيوان واحد (3X) أربعة عقيدات جلدية مرتفعة على كل قدم، تتماشى مع الورم الحليمي وترتبط بقطع من ديمودكس spp. وكيسات جريبية. كان هناك خمسة حيوانات في مجموعة الجرعة الأعلى كان لديه آفات جلدية متنوعة، تتكون أساسًا من الأورام الحليمية أو التهاب الجلد/الخراجات، مع وجود عقد لمفاوية متفاعلة.
كانت النتائج المجهرية عبر جميع المجموعات ضئيلة ومتسقة إلى حد كبير مع علم الأمراض الخلفية، دون ملاحظات على آثار سلبية باستثناء التغيرات الجلدية. في مجموعة الجرعة الأعلى (5X)، لوحظت آفات جلدية في 5 من أصل 8 حيوانات. وشملت هذه آفات جلدية مختلفة في الأقدام مثل الأورام الحليمية في حيوانين وآفات التهابية مع قطع شعر تتماشى مع التهاب الجريبات الشعرية/التهاب الجريبات القيحي في 3 حيوانات (الجدول 2). كما أظهرت بعض الحيوانات غدد لمفاوية تفاعلية. تم تفسير الآفات الجلدية في مجموعة 5X على أنها مرتبطة بالعلاج.

كانت تركيزات البلازما قابلة للقياس في جميع النقاط الزمنية في جميع الكلاب عبر مستويات الجرعة الأربعة (0.8، 1.6، 2.4، أو ) في أيام الدراسة 1 و 85 و 182. تركيزات ما قبل الجرعة في أيام الدراسة 85 و 182 وتركيزات

بعد 24 ساعة من الجرعة في أيام الدراسة 1 و 85 و 182 كانت المستويات منخفضة باستمرار، مما يشير إلى تراكم منخفض بعد الإدارات اليومية.
تم حساب معلمات الحركية الدوائية لجميع الكلاب المعالجة في اليوم الأول من الدراسة واليوم 182، وتم تلخيصها في الجدول 4 بالنسبة لمستوى الجرعة ويوم العلاج. كانت تقلبات معلمات الحركية الدوائية Cmax و AUCs عمومًا منخفضة أو معتدلة. كانت فترة نصف العمر حوالي 3 ساعات عبر جميع المجموعات في اليومين 1 و 182.
زاد التعرض مع الجرعة وكان الزيادة قريبة من التناسب مع الجرعة (الجدول 4). كان التعرض أعلى قليلاً في اليوم 182 من الدراسة مع نسبة AUC تبلغ 1.2 و1.4 و1.6 و1.2 للمجموعات من 2 إلى 5 على التوالي (الجدول 4). كان التعرض مماثلاً للذكور والإناث في كل مجموعة علاجية وكل يوم، مما يدل على عدم وجود أي اختلافات كبيرة بين الذكور والإناث.

كان الهدف من هذه الدراسة هو التحقيق في سلامة الإدارة اليومية الفموية المزمنة لمثبط جين كيناز الجديد، إيلونوستينيب، في الكلاب عند معدل الجرعة العلاجية (0.8 ملغ / كغ) والجرعات الزائدة. و ). إن إجراء هذه الدراسة هو شرط لتسجيل منتج طبي بيطري جديد. إنها جزء لا يتجزأ من حزمة بيانات السلامة، حيث توفر أدلة كبيرة على سلامة المنتج. تصميم الدراسة بما في ذلك اختيار مستويات الجرعة، عدد الحيوانات ونقاط النهاية

تم اختيارها وفقًا لإرشادات VICH رقم 43، بهدف تحديد هامش الأمان [10]. حتى الآن، يوجد دواء واحد آخر من مثبطات JAK مرخص للكلاب (أوكلاسيتي nib). حسب علم المؤلفين، لا توجد أي منشورات أخرى لبيانات الأمان التي تم توليدها مع أي مثبط JAK للاستخدام البيطري ومع الجرعات الزائدة، وتم نشر بيانات الأمان السريرية فقط عند الجرعات العلاجية.
أظهرت النتائج أن الإيلونوستينيب كان متسامحًا جيدًا من قبل الكلاب عند الجرعة العلاجية. وتم تحملها سريرياً بشكل جيد عند معدلات جرعات أعلى. خلال فترة الدراسة، لم تحدث أي آثار جانبية خطيرة أو وفيات، بما في ذلك عند تناول جرعة زائدة بمعدل 5 مرات لمدة 6 أشهر، وأكمل جميع الحيوانات المعالجة مدة الدراسة المخطط لها.
على الرغم من ملاحظة الأهمية الإحصائية في وزن الجسم وتغيرات وزن الجسم مقارنةً بالمجموعة الضابطة، لم يتم الكشف عن علاقة تعتمد على الجرعة. علاوة على ذلك، ظلت النتائج باستمرار أعلى قليلاً من قيم الضبط، ضمن النطاقات المرجعية المحددة، وافتقرت إلى الأهمية السريرية. قد يختلف التأثير على وزن الجسم بين مثبطات JAK اعتمادًا على
انتقائيتها لأنواع JAK. تم الإبلاغ عن زيادة الوزن في الكلاب مع استخدام أوكلاسيتيNib [18] وفي حالات قليلة جدًا تحت ظروف ميدانية مع إيلونوسيتيNib [19]. في البشر، تم الإبلاغ عن أن الآلية وراء زيادة الوزن الناتجة عن توفاسيتينيب مرتبطة بتقليل نشاط JAK3، الذي يُعتبر مرتبطًا بتطور السمنة [20]. باريسيتينيب، وهو نظير كيميائي قريب من إيلونوسيتيNib، يظهر فعالية أقل بكثير ضد JAK3، مما يؤدي إلى زيادة وزن محدودة، وبالتالي يدعم دوره المحتمل المفيد في السمنة وتطور الأمراض الأيضية [21].
كانت النتائج السريرية مرتبطة بشكل رئيسي بآفات جلدية على شكل كيسات بين الأصابع (IDC) أو التهاب الجريبات الشعرية بين الأصابع. بينما لوحظت الآفات الجلدية مع زيادة الجرعات، كانت خفيفة وغير متوقعة مع تعديل المناعة. إن وجود الأورام الحليمية الجلدية، أو IDC أو التهاب الجريبات الشعرية معروف في الأبحاث أو في الكلاب البيجل المخبرية، حيث توجد نسبة أعلى من المعتاد من IDC وعادة ما تتفاقم بسبب نوع الأرضيات المستخدمة في الاختبار.

الجدول 4 ملخص للمعلمات الدوائية الحيوية المعطاة عن طريق الفم مرة واحدة يوميًا لمدة 6 أشهر عند 4 مستويات جرعة

المرافق مع وجود فائض من الرطوبة الناتجة عن إجراءات التنظيف اليومية [22-23]. في دراسة بحثية أولية سابقة، لم يتم ملاحظة حالات التهاب الأمعاء التقرحي خلال فترة الدراسة عندما تم الحفاظ على الكلاب على أرضيات خرسانية مع فرشة من قش الذرة (تقرير داخلي). من المعروف أن مثبطات المناعة مثل JAKis تزيد من حدوث التهاب الأمعاء التقرحي في الدراسات المخبرية، لكن لم يتم ملاحظة هذا التأثير أو تم رؤيته فقط بنسبة منخفضة في التجارب السريرية مع الكلاب المملوكة للعملاء [24]. هذه النتائج تتماشى مع التأثير المعروف لفئة JAKi المتمثل في زيادة القابلية للإصابة بالعدوى الموضعية. بينما زادت نسبة الآفات مع الجرعة، كانت خفيفة وحُلت بواسطة العلاجات القياسية.
وفقًا للنتائج السريرية، كشفت التحليلات المجهرية للجلد عن وجود ورم حليمي في مجموعة الجرعة العالية. الأورام الحليمية هي نموات حميدة ناتجة عن فيروس الورم الحليمي الكلبي، وعادة ما تسبب القليل من الانزعاج الظاهر أو المضاعفات وتكون ذاتية التحديد. كما تم ملاحظة الأورام الحليمية مع الأوكلاسيتي nib وتم امتصاصها بشكل عفوي. هذه الحالات شائعة في عموم السكان الكلاب، وخاصة في الكلاب المخبرية. الأورام الحليمية التي تم رؤيتها في هذه الدراسة تتماشى مع الأورام الحليمية الخارجية، التي تميل إلى أن تكون من أصل فيروسي، وتحدث بشكل شائع في الكلاب التي تقل أعمارها عن عامين، وتتناقص بشكل عفوي. في الدراسة الحالية، كانت إحدى حالات الورم الحليمي الموجودة على إحدى الأرجل في كلب واحد مرتبطة أيضًا بقطع من ديمودكس كانيس. تعتبر عث ديمودكس كانيس جزءًا من الفلورا الطبيعية لجلد الكلاب وعادة لا تسبب أي مرض سريري. تعتبر عدوى ديمودكس تأثيرًا محتملًا معروفًا لتثبيط JAK نتيجة لتثبيط المناعة. بشكل عام، اعتُبرت النتائج الجلدية ذات تأثير محدود، حيث كانت معظم الحالات تحت السريرية والحالات السريرية تستجيب عادةً بشكل جيد للرعاية الروتينية.
كان العلاج بالإيلونوستينيب مرتبطًا بتأثيرات خفيفة على معايير علم الدم المرتبطة بكتلة خلايا الدم الحمراء. تم الإبلاغ عن تغييرات مماثلة في المعايير الدموية عادةً للأدوية المثبطة لإنزيم JAK المستخدمة في المرضى البشر المصابين بالتهاب المفاصل الروماتويدي وكذلك في الكلاب المعالجة بالعلاج المثبط لإنزيم JAK. يبقى نمط تلك التغيرات عمومًا طفيفًا إلى معتدل وقد يُلاحظ فقط خلال فترة زمنية قصيرة. على الرغم من التشابه في النمط، تم ملاحظة اختلافات في التأثيرات بين مثبطات JAK المستخدمة في الطب البشري. أظهر العلاج بالباريسيتينيب انخفاضًا أوليًا في مستوى الهيموغلوبين ضمن النطاق الطبيعي تلاه زيادة طفيفة، بينما كان لبعض مثبطات JAK الأخرى مثل الأوباداسيتينيب تأثير محدود على الهيموغلوبين. أدى علاج الإيلونوستينيب إلى انخفاضات خفيفة في معايير خلايا الدم الحمراء (الهيموغلوبين، الهيماتوكريت، RBC، MCH وMCHC)، والحمضات. كانت التأثيرات تعتمد على الجرعة ومتسقة مع التأثيرات الديناميكية الدوائية المعروفة لتثبيط JAK، مما قد يؤثر على تكوين كريات الدم الحمراء وتمايز الحمضات وتنشيطها. كانت الانخفاضات
كانت التأثيرات في مجموعات الجرعة الزائدة من خفيفة إلى معتدلة. بالمقابل، ظلت معايير خلايا الدم الحمراء ضمن النطاق المرجعي في مجموعة 1 X (الشكل 3). من غير المحتمل أن تكون الأعداد المنخفضة قليلاً من الحمضات ذات دلالة بيولوجية. فيما يتعلق بنخاع العظام، تم الإبلاغ عن نسب المايلويد: الإريثرويد المنخفضة كمرتبطة بالعلاج في كلبين، وكانت متسقة مع استجابة نخاع العظام الطبيعية فسيولوجياً لكتلة خلايا الدم الحمراء المنخفضة على الرغم من عدم وجود تأثير واضح على الأعداد المطلقة من الخلايا الشبكية. لم يُلاحظ تأثير رئيسي للعلاج على سلالات الخلايا الأخرى، مما يشير إلى تأثير انتقائي نسبي على مسارات محددة تعتمد على JAK.
كانت هناك زيادات طفيفة في الفبرينوجين عند الجرعات المرتفعة، ومع ذلك، أشار ملف الكيمياء السريرية إلى ارتفاع فردي في مستويات البروتين الكلي والغلوبولين، مصحوبًا بانخفاض مستويات الألبومين ونسب الألبومين/الغلوبولين. كانت مستويات بروتين سي التفاعلي (CRP) أيضًا أعلى. ومن الجدير بالذكر أن جميع الكلاب التي أظهرت هذه الارتفاعات كانت تعاني أيضًا من مرض جلدي مرئي. كانت هذه النتائج نموذجية لاستجابة المرحلة الحادة وكانت مرتبطة زمنيًا بتغيرات التهابية مجهرية في الجلد، يُفترض أنها ناتجة عن التهاب الجريبات الشعرية بين الأصابع. لم تُلاحظ أي تغييرات ذات صلة أخرى في معايير علم الأمراض السريرية.
لم يكن هناك تأثير رئيسي لعلاج الإيلونوستينيب على إجمالي مجموعات خلايا الكريات البيضاء (CD5+ إجمالي الخلايا اللمفاوية التائية، CD4+ خلايا Th، CD8+ خلايا Tc، CD21+ خلايا B (CD45 + CD5- CD21+) والوحيدات). عدم وجود تأثيرات ملحوظة في هذه الدراسة ليس مفاجئًا ويعكس دراسة حديثة على البشر تتعلق بتحليل نمط خلايا الكريات البيضاء في الدم المحيطي من متطوعين أصحاء تم علاجهم بالتوفاسيتينيب. في هذه الورقة، كانت التغيرات طفيفة وقابلة للعكس. بالمثل، أظهر علاج الباريسيتينيب في مرضى التهاب المفاصل الروماتويدي المشاركين في التجارب السريرية من المرحلة الثالثة تغييرات طفيفة وقابلة للعكس في مجموعات الخلايا اللمفاوية. معظم مثبطات JAK تظهر تأثيرًا محدودًا على مجموعات الخلايا اللمفاوية بسبب آلية عملها التي تستهدف مسارات الإشارات داخل الخلايا بدلاً من التأثير مباشرة على مستقبلات سطح الخلية أو مسارات التمايز. تقدم نتائج هذه الدراسة دليلًا على أن الإيلونوستينيب لا يغير بشكل كبير مجموعات خلايا المناعة عند الجرعة العلاجية. وهذا يشير إلى ملف أمان ملائم فيما يتعلق بالاحتمالية الكامنة لقمع المناعة، وهي مسألة غالبًا ما ترتبط بالأدوية المناعية.
كانت تغييرات وزن الأعضاء طفيفة، غير معتمدة على الجرعة أو مرتبطة بالنتائج النسيجية المرضية، وبالتالي تم الاستنتاج بأنها ليست ذات أهمية بيولوجية عند الجرعة العلاجية. بينما أظهرت الدراسات الحديثة أن مسار JAK/STAT حاسم للأعضاء الأيضية مثل الأنسجة الدهنية والكبد والبنكرياس، لم تكشف الدراسة عن أي تأثير على الأعضاء المستهدفة الأيضية الرئيسية، مثل الكبد والكلى أو الأعضاء اللمفاوية الأولية. ظلت النسيجية المرضية لجميع الأعضاء غير ملحوظة مع
باستثناء التغيرات الجلدية الملحوظة. ظلت وظائف الكبد، كما تم تقييمها بواسطة الإنزيمات بما في ذلك الفوسفاتاز القلوي، والألانين أمينوترانسفيراز، والأسبارتات أمينوترانسفيراز، غير متأثرة. كانت المؤشرات الكيميائية الحيوية مثل مستويات الكرياتينين والبولة في البلازما، بالإضافة إلى تحليل البول، ضمن النطاقات الطبيعية لمجموعات العلاج. لم يتم ملاحظة المخاوف المحتملة من العلاج بمثبط المناعة الذي قد يؤدي إلى تعزيز أو تفاقم تلف الأعضاء المختلفة عند استخدام الإيلونوسيتينيب بالجرعة العلاجية الموصى بها والجرعات الزائدة.
تم تصميم جدول أخذ عينات الدم لتقييم الديناميكا الدوائية لمراقبة تعرض الجسم للدواء، مع تجنب التداخل مع تقييم نقاط الأمان الأساسية. لتعظيم التعرض الجهازي، تم إعطاء الأقراص أثناء إطعام الكلاب، حيث يوجد تقريباً زيادة في التوافر البيولوجي الفموي للإيلونوسيتينيب عند إعطائه مع الطعام أو بعد تناول الطعام.
كان التباين بين الأفراد عمومًا منخفضًا إلى معتدل ) ومتسقة عبر المجموعات بالنسبة لمعلمات PK Cmax و AUCs. كانت التركيزات المتبقية بعد 24 ساعة من الجرعة في أيام الدراسة 1 و 85 و 182، بالإضافة إلى التركيزات قبل الجرعة في أيام الدراسة 85 و 182، عمومًا منخفضة، مما يشير إلى تراكم محدود. يتماشى هذا مع التوقعات بالنظر إلى نصف عمر الدواء، وهو ما تم تأكيده بشكل أكبر من خلال الزيادة المعتدلة في التعرض التي لوحظت في يوم الدراسة 182.
أظهر التعرض زيادة قريبة من التناسب مع الجرعة، ولم يتم الكشف عن اختلافات كبيرة بين الجنسين، مما يشير إلى استجابة متسقة وقابلة للتنبؤ تجاه الدواء عبر جرعات وجنسيات مختلفة. بشكل عام، أكدت التحليلات الدوائية أن الكلاب كانت تتلقى جرعات متسقة ومعرضة للإيلونوستينيب، مما يدعم الاستنتاجات المتعلقة بسلامة المنتج.
بينما توفر الدراسة رؤى حول سلامة الإيلونوستينيب في الكلاب عند الجرعات الزائدة لتحديد هامش الأمان، تم إجراؤها في بيئة مختبرية محكومة باستخدام عدد صغير نسبيًا من كلاب البيجل الصحية. وبالتالي، قد لا تمثل النتائج بشكل كامل التباين الذي يُرى في مجموعة الكلاب الأوسع تحت ظروف الميدان. يمكن أن تؤثر عوامل مثل الحالات الصحية الموجودة مسبقًا، والسلالات المختلفة، والتأثيرات البيئية على ملف سلامة الدواء في البيئات الواقعية. تم إجراء ثلاث دراسات سريرية لدعم سلامة وفعالية الإيلونوستينيب في مجموعات الكلاب المتنوعة في أوروبا والولايات المتحدة.

في الختام، توفر هذه الدراسة بيانات شاملة عن سلامة استخدام الإيلونوستينيب، وهو مثبط جديد لجين JAK، في الكلاب. تم إجراء الدراسة وفقًا لإرشادات VICH رقم 43 وهدفت إلى تحديد هامش الأمان للمنتج البيطري الدوائي الجديد. نتائجنا
تشير إلى أن الإيلونوستينيب كان جيد التحمل في الكلاب عند الجرعة العلاجية وحتى عند جرعات تصل إلى خمسة أضعاف، دون ملاحظة أي آثار جانبية خطيرة أو وفيات.
كانت النتيجة السريرية الرئيسية هي زيادة تعتمد على الجرعة في الكيسات بين الأصابع (IDC)، وهو نتيجة تتماشى مع التأثير المعروف لفئة مثبطات JAKi المتمثل في زيادة القابلية للإصابات الموضعية. قد تكون IDC أيضًا ناتجة عن نوع الأرضيات المستخدمة في مرافق الاختبار ولم تُلاحظ عندما كانت الكلاب تعيش على الأسمنت وتستخدم فرشة من حبوب الذرة. ومع ذلك، كانت هذه الآفات عمومًا خفيفة وحُلت بواسطة العلاجات القياسية. بالإضافة إلى ذلك، تم ملاحظة الأورام الحليمية، وهي نموات حميدة تسببها فيروس الورم الحليمي الكلبي، لكنها شائعة في عموم السكان الكلاب وعادة ما تحل بشكل تلقائي.
تضمنت التغيرات المرتبطة بإيلونوسيتينيب انخفاضات طفيفة في معايير كريات الدم الحمراء والحمضات في مجموعات الجرعة العالية، بما يتماشى مع التأثيرات الديناميكية الدوائية المعروفة لتثبيط JAK، بينما ظلت مجموعة الجرعة العلاجية ضمن النطاق الطبيعي. لم تُلاحظ تغييرات ذات دلالة سريرية في تجمعات خلايا الكريات البيضاء، مما يشير إلى تأثيرات محدودة على تجمعات خلايا المناعة.
بشكل عام، تشير نتائج هذه الدراسة إلى وجود ملف أمان إيجابي للإيلونوسيتينيب، مما يدعم استخدامه المزمن في الكلاب.

يشكر المؤلفون طاقم الدراسة على مساعدتهم القيمة في إجراء الدراسة.

إيمانويل أ. كونتس، ليس غابور وسيلين إ. توتينز أعدوا المخطوطة، وراجعوا وحرروا المخطوطة. كان ليس غابور مسؤولاً عن تحليل الأمراض، والتفسير وراجع المرحلة المرضية وتقرير الدراسة. كانت سيلين إ. توتينز مسؤولة عن تحليل وتفسير الديناميكا الدوائية، وراجعت المرحلة التحليلية الحيوية وتقرير الدراسة. قرأ جميع المؤلفين ووافقوا على المخطوطة النهائية.

تم تمويل الدراسة من قبل إيلانكو لصحة الحيوان.

لم يتم إنشاء أو تحليل أي مجموعات بيانات خلال الدراسة الحالية.

استند تصميم الدراسة إلى الإرشادات الخاصة بتقييم سلامة الحيوانات المستهدفة للأدوية الجديدة (إرشادات VICH 43)، والمعايير المعترف بها لضمان الجودة (إدارة الغذاء والدواء الأمريكية (FDA) لوائح الممارسات المخبرية الجيدة (GLP)، 21 قانون اللوائح الفيدرالية (CFR) الجزء 58 ومنظمة التعاون والتنمية الاقتصادية (OECD) سلسلة حول مبادئ الممارسات المخبرية الجيدة ومراقبة الامتثال، الرقم 13). تم إجراء الدراسة في منشأة معتمدة من AAALAC وتمت الموافقة عليها من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوانات المؤسسية الخاصة بهم. تم إعداد هذه المخطوطة وفقًا لإرشادات ARRIVE.

غير قابل للتطبيق.

يعلن المؤلفون عدم وجود مصالح متنافسة.

تاريخ الاستلام: 26 أغسطس 2024 / تاريخ القبول: 7 فبراير 2025
تم النشر عبر الإنترنت: 05 مارس 2025

تظل Springer Nature محايدة فيما يتعلق بالمطالبات القضائية في الخرائط المنشورة والانتماءات المؤسسية.

Clinical trial number Not applicable.
Keywords Ilunocitinib, Zenrelia , Safety, Dog, Oral

Elanco Animal Health, Yarrandoo R&D Centre, Kemps Creek, Sydney 2178, Australia
Elanco Animal Health, Crisco Uno, Bâtiment C, 3-5 avenue de la Cristallerie, CS 80022-92317, Sèvres Cedex, France

Skin disorders rank as one of the most frequent reasons for pet owners to seek veterinary care, with pruritus being a particularly distressing symptom significantly diminishing the quality of life for both dogs and their owners [1]. Atopic dermatitis is a prevalent inflammatory condition affecting roughly of the canine population. It is a primary cause of pruritus, and one of the most frequent underlying causes of presentation to veterinary practitioners [2,3]. The pathogenesis of canine atopic dermatitis is complex. It involves genetic factors, a dysfunction of the skin barrier, a disruption of the skin microbiota, immune dysregulation, and allergic sensitization [4]. In dogs, studies have shown a strong correlation between atopic dermatitis and genetic mutations. However, the disease is multifactorial, and the environment plays an important role. Other notable causes of pruritus include flea allergy dermatitis, food allergies, and sarcoptic mange. Pruritus is not merely a symptom; it exacerbates allergic conditions by repeatedly disrupting the skin barrier, thus facilitating the entry of allergens, bacteria, and yeasts. Therefore, addressing pruritus is not just symptomatic relief but also serves as an etiological treatment strategy.
The pharmacological landscape for managing allergic and pruritic conditions in dogs includes several drug families such as glucocorticoids, calcineurin inhibitors (e.g., Cyclosporin A), Janus Kinase inhibitors (JAKi), and anti-IL-31 monoclonal antibodies ( mAb ). While many of these treatments are effective, they may come with undesirable side-effects, such as those observed with glucocorticoids, or may alleviate pruritus without addressing underlying inflammation, as with anti-IL-31 mAb . The veterinary market has been limited to a single JAKi, oclacitinib, for the treatment of canine atopic dermatitis and associated pruritus, while human medicine has access to a broader range of JAKi for a wide range of immune mediated conditions [5, 6].
Ilunocitinib, a novel JAKi, has recently been introduced to the veterinary field as Zenrelia , offering a new option for managing pruritus associated with allergic dermatitis and atopic dermatitis in dogs. Studies have demonstrated its efficacy with pharmacological properties suitable for once-daily dosing, ensuring sustained therapeutic levels [7-9].
This study aimed to assess the safety profile of ilunocitinib in dogs when given once daily, over 6 months at and multiple overdose levels (1.6 (2X), 2.4 and ). Furthermore, the safety of any new veterinary medication must be evaluated in the target species to meet regulatory requirements.

This laboratory study was conducted with reference to the guideline for evaluating the target animal safety of new pharmaceuticals (VICH Guideline 43) [10], and in accordance with Good Laboratory Practice [11-12]. The study protocol was reviewed and approved by the Testing Facility Institutional Animal Care and Use Committee and was conducted in compliance with the Final Rules of the Animal Welfare Act regulations and the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals [13-14]. This manuscript was prepared in compliance with the ARRIVE Guidelines Checklist for animal in vivo experiments [15].

A total of 22 male and 22 female experimentally naïve Beagle dogs purchased from a laboratory animal supplier (Envigo USA) of approximately 11 to 12 -months of age were acclimatized for approximately 3 weeks. Following veterinary examinations and clinical pathology evaluations, 20 males and 20 females (weighing 8.8 to 12.4 kg and 5.5 to 11.2 kg , respectively, at randomization) were selected and assigned to the control or treatment groups on study day -1 .
Dogs were pair-housed (2 animals/cage of same sex) from arrival until study day -3 and were then individually housed for the duration of the study in stainless steel mobile cages with poly-coated diamond shaped flooring containing animal enrichment. Through the whole study duration, tap water was available ad libitum and animals were offered daily dry laboratory diet (Lab Diet Certified Canine Diet #5007) and a palatable wet canned food (Royal Canin Veterinary Diet Recovery RS). On dosing days (study day 1 to 182), dogs were treated in fed conditions i.e. dogs were fasted overnight and offered canned food before tablet administration. The daily ration of dry food was offered 1 to 2 h following dosing.

This was a randomized, controlled, blinded, 6-month study with a parallel design. Using a block randomization procedure stratified by sex, 20 males and 20 females were randomly allocated on study day -3 to one of the following five groups ( 4 males and 4 females per group): Group 1: Untreated control (sham-dosed with 5 mL of tap water); Group 2: Ilunocitinib film-coated tablets at a target dose level of ; Group 3: Ilunocitinib film-coated tablets at a target dose level of kg (2X); Group 4: Ilunocitinib film-coated tablets at a target dose level of and Group 5: Ilunocitinib film-coated tablets at a target dose level of . The experimental unit was the individual dog.
With the exception of individuals either administering the treatments or with roles unrelated to data collection,
all other personnel were blinded to the treatment group assignments.

The dose levels were selected based on the maximum therapeutic dose (i.e. ) and the requirement to test multiples of the maximum therapeutic dose, i.e. and 5 X the therapeutic dose. Doses for each individual animal were based on the most recent body weight. Commercial tablets of ilunocitinib, available in , and 15 mg strength, were dispensed. These tablets were combined appropriately to meet the individual’s precise dosage requirement, ensuring there was no underdosing. The administration of these tablets was carried out orally, once a day, over a period of 6 months, from study day 1 to 182 . Approximately 5 mL of water was given after each administration and the mouth checked to ensure the tablets had been swallowed. Control animals were sham treated with 5 mL of tap water. As ilunocitinib exposure has been shown to be increased by food, dogs were fed within 30 min prior to each dosing.

Animals were observed twice daily, at least 6 h apart, over the entire course of the study for morbidity, mortality and injury. Clinical examinations of each dog were performed before treatment administration and at approximately 2 and 5 h post treatment. Observations included, but were not limited to, evaluation of skin, fur, eyes, ears, nose, oral cavity, thorax, abdomen, external genitalia, limbs and feet, respiratory and circulatory signs, autonomic effects such as salivation, and nervous system effects including tremors, convulsions, reactivity to handling, and unusual behavior.
Body weights for all animals were recorded during the acclimation phase (study days -12 and -1 ) and then once weekly during the study. Food consumption (dry and wet food) was measured and recorded daily. Complete physical examinations by a veterinarian were conducted once during acclimation and every two weeks during the dosing phase on study days , 126, 140 154, 168 and 182. Assessments including overall general condition and behavior, ocular inspection, integument, musculoskeletal, gastrointestinal, body temperature, cardiovascular and respiratory systems including auscultation-based assessment, reproductive, lymphatic, urinary and nervous systems. Neurological examinations were conducted once during acclimation on study day -6 and on study day 182 including evaluation of the general attitude, behavior, motor function, cranial nerves (nystagmus, pupillary response), proprioceptive and postural reactions, and spinal nerves. Ophthalmoscopic examinations were conducted by a board-certified ophthalmologist on all animals on study days -4 and 182 .

Blood samples were collected from the jugular vein for the evaluation of hematology, clinical chemistry and coagulation variables at pre-test, and on study days 29 , 57, 85, 113, 141, 169 and 183. The complete panel of clinical pathology parameters (hematology, blood chemistry and urinalysis) according to VICH Guideline 43 [10] are listed in Table 1. Urine samples were collected using steel pans placed under the cages for at least 16 h at the same timepoints.
Whole blood samples were also collected from the jugular vein for the evaluation of the leukocyte subsets and phenotypes on study days -16 and -8 , and on study days and 183. The immunophenotype profiling by flow cytometry included total T lymphocytes (CD45 + CD5 + or CD5 + T cells), Helper T lymphocytes (CD45+CD5+CD4+or CD4+Th cells), Cytotoxic T lymphocytes (CD45 + CD5 + CD8 + or CD8 + Tc cells), B lymphocytes (CD45 + CD5- CD21 + or CD21 + B cells) and monocytes (CD45 + CD14+).

Blood samples ( 1 mL ) were collected from all animals via the jugular vein for determination of the plasma concentrations of ilunocitinib. Samples were collected at pre-dose and at and 24 h post-dosing on the day of the first and last dose (study days 1 and 182) and at pre-dose and at 1 and 24 h post-dosing at study day 85. Blood samples were collected in tubes containing EDTA. Blood was processed to plasma within one hour of collection and plasma samples were stored frozen at until analyzed. Plasma concentrations of ilunocitinib were determined using a validated Liquid Chro-matography-Tandem Mass Spectrometry (LC-MS/MS) method according to Guidance for Industry [16-17].
The bioanalytical data were processed as individual concentration vs. time profiles using a non-compartmental analysis (NCA). Calculations were performed with the software Phoenix WinNonlin (version 8.3; Certara, USA). Tmax and Cmax were derived from observed values. AUCs were calculated using the Linear Up Log Down method. In addition, T1/2 was calculated using the best fit method and dose, time and sex effects were evaluated based on Cmax and AUClast ratios.

At study termination (study day 183), the dogs were humanely euthanized by an intravenous injection of pentobarbital sodium/phenytoin solution under sedation with Telazol (tiletamine/zolazepam) subcutaneous injection. Gross and microscopic examinations were carried out on all animals by a board-certified veterinary pathologist.

All statistical analyses were performed using SAS software (Version 9.4, TS1M6 SAS/STAT 15.1, Copyright© 2002-2012 by SAS Institute Inc., Cary, NC, USA).
Endpoints measured once post-treatment (organ weights) that did not include a pre-treatment measurement were analyzed using analysis of variance (ANOVA) with ‘treatment,’ ‘sex’, and ‘treatment by sex’ as fixed effects.
Endpoints measured multiple times post-treatment that included a pre-treatment measurement (Serum chemistry, C-reactive protein, coagulation, hematology, urinalysis, body weight, body weight changes and food consumption) were analyzed using repeated measures analysis of covariance (RMANCOVA) with ‘treatment’, ‘time’, and ‘sex’; the two-way interactions ‘treatment by time,’ ‘treatment by sex’, and ‘sex by time’; the three-way interaction ‘treatment by time by sex’ and a covariate all as fixed effects. The last available pre-treatment value was used as the covariate.
If the interaction terms were significant ( level for two-way interactions and for the three-way interaction), treated groups were compared to the control either within each sex (treatment by sex significant), within each time point (treatment by time significant) or main effect only (neither treatment by sex nor treatment by time significant).

For immunophenotyping/peripheral blood leukocytes, a generalized linear mixed model for repeated measures analysis of variance (mixed model) was conducted. For each endpoint, the model tested for the effects of treatment, time, sex and all two and three-way interactions. The last available pre-treatment value was included in the model as a covariate. The evaluation proceeded as described for RMANCOVA.

During the dosing period of the study, the mean doses of ilunocitinib administered for , and 5 X , were and , respectively and the target dose rate planned was achieved for all treated animals on all days.

All animals were in good health throughout the duration of the study and completed the study. There were no serious adverse effects during the course of the study.
Test article-related clinical observations revealed a dose-dependent presence of interdigital furunculosis, or cysts (Table 2), with or without discharge on one or more paws. Lesser cutaneous lesions such as occasional swelling or scabbing of paws, along with thickening and/or discoloration of paw skin were also noted.

No ophthalmological or neurological findings were associated with treatment.

Throughout the study, the mean body weight ( ± standard error) of control dogs was , while the mean body weights in the treatment groups were as follows: in the 1 X group, in the 2 X group, in the 3 X group, and in the 5 X group. Body weight gain for the control dogs was , compared to in the 1 X group, in the 2 X group, in the 3 X group, and in the 5 X group. A statistically significant main effect of treatment was observed for body weight with statistically significant increases in the and 5 X groups. A statistically significant main effect of treatment was observed for body weight change ( ) with statistically significant increases at 3 X and 5 X . The weekly averaged daily food consumption showed a statistically significant ( ) time by treatment interaction.

Summary data for selected hematology and clinical chemistry parameters are presented in Table 3; Figs. 1, 2 and 3.
Statistically significant treatment effects for hemoglobin ( ), hematocrit ( ) and red blood cell count (RBC; ) were noted reflecting minimally lowered mean hemoglobin for pooled sexes at 2 X , 3 X , and 5 X , minimally to mildly lower mean hematocrit and RBC for pooled sexes at 3 X and 5 X , relative to control means. These differences began from study day 29 and persisted through study day 183. Concurrently, there was a significant time by treatment interaction for mean corpuscular hemoglobin (MCH; ) and a significant treatment main effect for mean corpuscular hemoglobin concentration (MCHC; ) due to minimally lower mean MCH at 3 X and 5 X and minimally lower mean MCHC 2X, 3X and 5X.
Eosinophils showed a significant sex by treatment interaction ( ) in females. For females, treatment groups at 3 X and 5 X had lower means compared to controls from study days 29 through 183. There were no treatment-related effects on lymphocytes, monocytes, basophils and reticulocytes. Two dogs in the 5X group had minimally lower myeloid: erythroid ratios.
There was a significant treatment effect for fibrinogen ( ) at 3 X and 5 X doses, with marginally elevated concentrations from study days 57 to 183. The other coagulation parameters (prothrombin time and activated partial thromboplastin time) remained in the reference range throughout the study.
Total protein values were significantly ( ) higher in males at , and 5 X and displayed a significant time by treatment interaction ,

characterized by minimally higher means on study day 113 at 3 X and on study days 85,113 , and 141 at 5 X .
There was a significant main effect of treatment for albumin ( ), with minimally lower mean albumin concentration at 3 X and 5 X doses beginning on study day 57 . Globulin and albumin/globulin ratio had significant 3 -way interactions ( and , respectively). Mean globulin concentrations were minimally higher and mean albumin/globulin ratios were minimally to mildly lower than control means in males at , and 5 X and in females at 5 X beginning on study day 57, 85, or 113 and persisting through study day 183 . No changes were noted for alkaline phosphatase, alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase, triglycerides, plasma creatinine and urea levels or any other clinical chemistry parameters listed in Table 1, all remaining within normal ranges for the treatment groups.
There were no test article-related effects on urinalysis endpoints in either sex at any dose level.

There were no test article-related effects on leukocyte analysis (immunophenotyping) parameters in either sex at any dose level.

There was a single main treatment effect related to reduced combined adrenal gland weights in males treated at 2 X and 5 X whereas males at 1 X and 3 X doses were not changed when compared to controls. In contrast, females at 3 X had increased combined adrenal gland weight. Prostate weight ( ), prostate weight as a percent of body weight and the ratio of prostate weight to brain weight were significantly decreased in the 5X group compared to controls.
Macroscopic observations affecting 11 animals across all groups were recorded at the end of the study. Two animals ( 0 X and 2 X ) exhibited unilateral thickening of the left ear pinnae, consistent with focal trauma and were considered not treatment-related. There were low numbers of incidental findings, including a single case of enlarged thyroid/parathyroid glands in one female

treated at 1X, and two focal lesions on the lungs of animals treated at 5 X .
The remaining six animals showed only skin changes, some with enlarged draining lymph nodes, interpreted as normal responses to cutaneous inflammation. One animal (3X) had four raised dermal nodules on each paw, consistent with papillomas and associated with Demodex spp. fragments and follicular cysts. Five animals in the highest dose group had various skin lesions, primarily papillomas or dermatitis/furunculosis, with reactive lymph nodes.
Microscopic findings across all groups were minimal and largely consistent with background pathology, with no adverse effects noted except for cutaneous changes. In the highest dose group (5X), cutaneous lesions were observed in 5 out of 8 animals. These included various feet skin lesions such as papillomas in 2 animals and inflammatory lesions with hair fragments consistent with folliculitis/furunculosis in 3 animals (Table 2). Some animals also displayed reactive lymph nodes. The cutaneous lesions in the 5X group were interpreted as treatment-associated.

Plasma concentrations were quantifiable at all timepoints in all dogs across the four dosing levels (0.8, 1.6, 2.4, or ) on study days 1,85 , and 182. Pre-dose concentrations on study days 85 and 182 and concentrations

24 h after dosing on study days 1,85 , and 182 were consistently low, indicating low accumulation after daily administrations.
Pharmacokinetic parameters were calculated for all treated dogs on study day 1 and study day 182 and are summarized in Table 4 with respect to dose level and treatment day. The variability of the pharmacokinetic parameters Cmax and AUCs was generally low or moderate. The half-life was approximately 3 h across all groups on days 1 and 182 .
Exposure increased with dose and the increase was close to dose proportional (Table 4). Exposure was slightly higher at study day 182 with AUC ratio of 1.2, 1.4, 1.6, and 1.2 for groups 2 to 5 respectively (Table 4). Exposure was similar in males and females for each treatment group and day, demonstrating absence of any significant differences between males and females.

The objective of this study was to investigate the safety of chronic daily oral administration of a novel JAKi, ilunocitinib, in dogs at the therapeutic dose rate ( 0.8 mg / kg ) and overdoses ( and ). The conduct of this study is a requirement in order to register a new veterinary medicinal product. It is an integral part of the safety data package, providing substantial evidence of a product’s safety. The design of the study including selection of dose levels, number of animals and endpoints

were chosen in accordance with VICH Guideline 43, with the objective to establish a margin of safety [10]. To date, only one other JAKi is licensed for dogs (oclacitinib). To the authors’ knowledge, there is no other publication of safety data generated with any JAKi for veterinary use and with overdoses and only clinical safety data at the therapeutic doses are published.
The results demonstrated that ilunocitinib was welltolerated by dogs at the therapeutic dose ( ), and clinically well tolerated at higher dose rates. During the course of the study, no serious adverse effects or mortality occurred, including at 5 X overdose for 6 months, and all treated animals completed the planned study duration.
Although statistical significance in body weight and body weight changes was observed compared to the controls, no dose-dependent relationship was detected. Moreover, the results consistently remained slightly above control values, within established reference ranges, and lacked clinical relevance. The impact on body weight may vary among JAK inhibitors depending on
their selectivity for JAK subtypes. Weight gain has been reported in dogs with the use of oclacitinib [18] and in very few cases under field conditions with ilunocitinib [19]. In humans, the mechanism behind tofacitinibinduced weight gain has been reported to be linked to a reduction in JAK3 activity, which is implicated in obesity pathogenesis [20]. Baricitinib, a close chemical analog of ilunocitinib, exhibits significantly lower potency against JAK3, resulting in limited weight gain, thereby supporting its potential beneficial role in obesity and metabolic disease development [21].
Clinical findings were mainly related to skin lesions in the form of interdigital cysts (IDC) or interdigital furunculosis. Whilst cutaneous lesions were noted with increasing doses, they were mild and not unexpected with immune modulation. The finding of cutaneous papillomas, IDC or furunculosis is known in research or laboratory Beagle dogs, in which a higher than normal background incidence of IDC is present and generally exacerbated by the type of flooring used in the testing

Table 4 Summary of pharmacokinetic parameters administered orally once daily for 6 months at 4 dose levels

facilities together with an excess of moisture from daily cleaning procedures [22-23]. In a preliminary earlier research study, IDC were not observed during the course of the study when dogs were maintained on concrete floors with corn cob bedding (internal report). Immunosuppressants such as JAKis are known to increase the incidence of IDC in laboratory studies, but this effect has either not been observed or it has been seen only at a low incidence in clinical trials with client-owned dogs [24]. These findings are consistent with the known JAKi class effect of increased susceptibility to localized infections. While the incidence of the lesions increased with dose, they were mild and resolved by standard treatments.
Consistent with the clinical findings, microscopic analysis of the skin revealed the presence of papillomas in the high dose group. Papillomas are benign growths caused by the canine papillomavirus that generally result in little apparent discomfort or complications and are selflimiting. Papillomas were also observed with oclacitinib and resorbed spontaneously [25]. These conditions are common in the general canine population, particularly in laboratory dogs. The papillomas seen in this study are consistent with exophytic papillomas, which tend to be of viral origin, occur most commonly in dogs under 2 years of age, and regress spontaneously. In the current study, one of the cases of papilloma present on one paw in one single dog, was also associated with fragments of Demodex canis. D. canis mites are part of the normal flora of canine skin and usually cause no clinical disease. Demodex infection is a known potential effect of JAK inhibition secondary to immunosuppression [24-25]. Overall, the cutaneous findings were considered to have limited adversity, with most cases being sub-clinical and clinical cases typically responding well to routine care.
Treatment with ilunocitinib was associated with mild effects on hematology parameters associated with red cell mass. Similar variations in hematological parameters were typically reported for other JAKi used in human patients with rheumatoid arthritis [26] and in dogs treated with JAKi therapy [24]. The pattern of those alterations remains generally minor to moderate and is potentially only seen within a short period of time. Despite similarities in the pattern, differences in the effects were noted between JAKi used in human medicine. Treatment with baricitinib showed an initial decrease in hemoglobin within the normal range followed by a slight increase, while some other JAKi such as upadacitinib had limited impact on hemoglobin [27]. Ilunocitinib treatment induced mild decreases in red blood cell parameters (hemoglobin, hematocrit, RBC, MCH and MCHC), and eosinophils. The effects were dose-dependent and consistent with the known pharmacodynamic effects of JAK inhibition, potentially affecting erythropoiesis and eosinophil differentiation and activation. The decreases were
minimal to mild in the overdose groups. In contrast, red cell parameters within the 1 X group stayed within the reference range (Fig. 3). Slightly lower eosinophil counts are unlikely to have biological relevance. Regarding bone marrow, lower myeloid: erythroid ratios were reported to be treatment-related in two dogs and were consistent with a physiologically normal bone marrow response to the lower red blood cell mass despite no apparent effect on absolute reticulocyte counts. No main treatment effect on other cell lineages were observed, suggesting a relatively selective effect on specific JAK-mediated pathways.
There were minimal increases in fibrinogen at elevated doses, however, the clinical chemistry profile indicated individually elevated total protein and globulin levels, accompanied by reduced albumin levels and albumin/ globulin ratios. C-reactive protein (CRP) levels were also higher. Notably, all dogs exhibiting these elevations also presented with visible skin disease. These findings were typical of an acute phase response and were temporally associated with microscopic inflammatory changes in the skin, presumed to be secondary to interdigital furunculosis. No further relevant changes were observed in clinical pathology parameters.
There was no main treatment effect of ilunocitinib on overall leukocyte cell populations (CD5+total T lymphocytes, CD4+Th cells, CD8+Tc cells, CD21+B cells (CD45 + CD5- CD21+) and monocytes). The lack of significant effects observed in this study is not surprising and mirrors a recent human study involving peripheral blood leukocytes phenotype analysis from healthy volunteers treated with tofacitinib. In this paper, changes were minor and reversible [28]. Similarly, baricitinib treatment in rheumatoid arthritis patients involved in phase III clinical trials showed similar minimal and reversible changes in lymphocytes subsets populations [29]. Most JAKi’s exhibit limited impact on lymphocyte populations due to their mechanism of action targeting intracellular signaling pathways rather than directly affecting cell surface receptors or differentiation pathways. The findings of this study provide evidence that ilunocitinib does not significantly alter immune cell populations at the therapeutic dose. This suggests a favorable safety profile regarding potential immune suppression, a concern often associated with immunomodulatory drugs.
Organ weight changes were minimal, not dose dependent or correlative with histopathological findings, thus, they were concluded to be of no biological relevance at the therapeutic dose. While recent studies showed that the JAK/STAT pathway is critical for metabolic organs such as adipose tissue, liver and pancreas [30], the study did not reveal any effect on main metabolic target organs, such as liver, kidney or primary lymphoid organs. Histopathology of all organs remained unremarkable with the
exception of the cutaneous changes noted. Liver function, as assessed by enzymes including alkaline phosphatase, alanine aminotransferase, and aspartate aminotransferase, remained unaffected. Biochemical markers such as plasma creatinine and urea levels, along with urinalysis, were within normal ranges for the treatment groups. The potential concerns of a treatment with an immunosuppressant leading to promote or exacerbate different organ damage has not been observed when using ilunocitinib at the recommended therapeutic dose and overdoses.
The blood sampling schedule for pharmacokinetic assessment was designed to monitor drug exposure, while avoiding interference with the evaluation of primary safety endpoints. To maximize systemic exposure, the tablets were administered while the dogs were fed, since there is an approximate increase in oral bioavailability of ilunocitinib when given with food or after feeding.
The inter-individual variability was generally low to moderate ( ) and consistent across groups for the PK parameters Cmax and AUCs. Residual concentrations 24 h post-dosing on study days 1,85 , and 182 , as well as pre-dose concentrations on study days 85 and 182, were generally low, suggesting limited accumulation. This aligns with expectations considering the drug’s half-life, a fact further corroborated by the moderately increased exposure observed on study day 182 .
Exposure exhibited a near dose-proportional increase, and no significant differences were detected between sexes, indicating a consistent and predictable response to the drug across different doses and sexes. Altogether, the pharmacokinetic analysis confirmed that the dogs were consistently dosed and exposed to ilunocitinib, supporting conclusions regarding the product’s safety.
While the study provides insights into the safety of ilunocitinib in dogs at overdosing to identify a margin of safety, it was conducted in a controlled laboratory environment using a relatively small number of healthy Beagle dogs. Consequently, the findings may not fully represent the variability seen in a broader canine population under field conditions. Factors such as pre-existing health conditions, different breeds, and environmental influences can impact the drug’s safety profile in real-world settings. Three clinical studies have been conducted, to further support the safety and efficacy of ilunocitinib in diverse canine populations in Europe and in the United States [6-8].

In conclusion, this study provides comprehensive safety data on the use of ilunocitinib, a novel JAKi, in dogs. The study was carried out in accordance with the VICH Guideline 43 and aimed to establish a safety margin for the new veterinary medicinal product. Our findings
indicate that ilunocitinib was well-tolerated in dogs at the therapeutic dose and even at doses up to five times higher, with no serious adverse effects or mortality observed.
The main clinical finding was a dose-dependent increase in interdigital cysts (IDC), an outcome consistent with the known JAKi class effect of increased susceptibility to localized infections. IDC could also be due to the type of flooring used in the testing facilities and were not observed when dogs were housed on cement and used corncob bedding. However, these lesions were generally mild and resolved by standard treatments. Additionally, papillomas, benign growths caused by the canine papillomavirus, were observed but are common in the general canine population and usually resolve spontaneously.
Ilunocitinib-related changes included mild decreases in red blood cell parameters and eosinophils in the high dose groups, consistent with the known pharmacodynamic effects of JAK inhibition, while the therapeutic dose group stayed within the normal range. No clinically relevant changes were seen in leucocytes cell populations, indicating limited effects on immune cell populations.
Overall, the results of this study suggest a favorable safety profile for ilunocitinib, supporting its chronic use in dogs.

The authors thank the study staff for their valuable assistance with the conduct of the study.

Emmanuelle A. Kuntz, Les Gabor and Céline E. Toutain prepared the manuscript, reviewed and edited the manuscript. Les Gabor was responsible for the pathology analysis, interpretation and reviewed the pathological phase and study report. Céline E. Toutain was responsible for the pharmacokinetic analysis and interpretation, reviewed the bioanalytical phase and the study report. All authors read and approved the final manuscript.

The study was funded by Elanco Animal Health.

No datasets were generated or analysed during the current study.

The study design was based on the guidelines for evaluating the target animal safety of new pharmaceuticals (VICH Guideline 43), and recognized quality assurance standards (United States Food and Drug Administration (FDA) Good Laboratory Practice (GLP) Regulations, 21 Code of Federal Regulations (CFR) Part 58 and the Organization for Economic Cooperation and Development (OECD) Series on Principles of Good Laboratory Practice and Compliance Monitoring, Number 13). The study was conducted at an AAALAC accredited facility and approved by their Institutional Animal Care and Use Committee. This manuscript was prepared in compliance with the ARRIVE Guidelines.

Not applicable.

The authors declare no competing interests.

Received: 26 August 2024 / Accepted: 7 February 2025
Published online: 05 March 2025

Springer Nature remains neutral with regard to jurisdictional claims in published maps and institutional affiliations.