DOI: https://doi.org/10.1126/sciadv.aed3579
PMID: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/41779846
تاريخ النشر: 2026-03-04
المؤلف: Kenneth Ehses وآخرون
الموضوع الرئيسي: أبحاث بروتينات الصدمة الحرارية
نقاش
اختبار CellTiter-Glo® 2.0 هو طريقة متجانسة لقياس عدد الخلايا الحية في الثقافة من خلال قياس مستويات ATP، التي تعكس النشاط الأيضي. يحسن هذا الاختبار من النسخ السابقة من خلال توفير كاشف أكثر استقرارًا يحافظ على أكثر من 85% من إخراج الضوء عند تخزينه في 4°C لمدة شهرين أو في درجة حرارة الغرفة لمدة سبعة أيام. يسمح تصميم الاختبار بإضافة الكاشف مباشرة إلى الخلايا دون الحاجة إلى غسل مسبق أو إزالة الوسط، مما يسهل الفحص عالي الإنتاجية ويقلل من أخطاء التقطير. ينتج عن استخدام إنزيم Ultra-Glo™ Recombinant Luciferase الخاص في الاختبار إشارة مضيئة مستقرة مع عمر نصف يتجاوز ثلاث ساعات، مما يعزز مرونة وكفاءة الاختبار.
يظهر الاختبار حساسية ممتازة وخطية، مع ارتباط قوي بين اللمعان وعدد الخلايا عبر تنسيقات الألواح المختلفة. تم حساب عامل Z، وهو مقياس لدقة الاختبار، ليكون 0.81 لطبق 384 بئر و0.71 لطبق 1536 بئر، مما يشير إلى ملاءمة عالية لتطبيقات الفحص. بالإضافة إلى ذلك، فإن الاختبار أسرع من الطرق التقليدية، حيث يقضي على خطوات الحضانة الطويلة المطلوبة لاستخراج ATP. ومع ذلك، فإن الاعتبار الدقيق لعوامل مثل درجة الحرارة، والبيئة الكيميائية، وإمكانية تلوث ATP أمر حاسم لتحقيق الأداء الأمثل. بشكل عام، يمثل اختبار CellTiter-Glo® 2.0 تقدمًا كبيرًا في منهجيات تقييم حيوية الخلايا، حيث يقدم أداة موثوقة وفعالة للباحثين.
DOI: https://doi.org/10.1126/sciadv.aed3579
PMID: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/41779846
Publication Date: 2026-03-04
Author(s): Kenneth Ehses et al.
Primary Topic: Heat shock proteins research
Discussion
The CellTiter-Glo® 2.0 Assay is a homogeneous method for quantifying viable cells in culture by measuring ATP levels, which reflect metabolic activity. This assay improves upon previous versions by providing a more stable reagent that maintains over 85% light output when stored at 4°C for two months or at room temperature for seven days. The assay’s design allows for direct addition of the reagent to cells without the need for prior washing or medium removal, facilitating high-throughput screening and reducing pipetting errors. The proprietary Ultra-Glo™ Recombinant Luciferase used in the assay generates a stable luminescent signal with a half-life exceeding three hours, enhancing assay flexibility and efficiency.
The assay demonstrates excellent sensitivity and linearity, with a strong correlation between luminescence and cell number across various plate formats. The Z-factor, a measure of assay precision, was calculated to be 0.81 for a 384-well plate and 0.71 for a 1536-well plate, indicating high suitability for screening applications. Additionally, the assay is faster than traditional methods, as it eliminates lengthy incubation steps required for ATP extraction. However, careful consideration of factors such as temperature, chemical environment, and potential ATP contamination is crucial for optimal performance. Overall, the CellTiter-Glo® 2.0 Assay represents a significant advancement in cell viability assessment methodologies, offering a reliable and efficient tool for researchers.